[发明专利]纳米化人参的体外抗肿瘤作用

说明书

技术领域：

本发明公开了纳米化人参体外抗肿瘤活性及其中皂苷的含量变化和安全性研究，并提供其制备方法及条件，研究表明纳米化人参对人肺癌上皮细胞A549和人宫颈癌细胞Hela，具有较好的抑制作用，且对免疫系统没有明显的负面影响。以人参皂苷Rg1,Re,Rb1,Rd为参照，纳米化后人参皂苷的含量比微米生晒参粉提高了2.5倍以上。该研究属于生药有效成分提取制备及其在医药与保健品领域的应用方法，并为预防及治疗肿瘤药开发提供依据。 

背景技术：

21世纪，纳米技术取得快速的发展，已被广泛的应用于生物医药领域，例如纳米药物载体、生物分子成像等。在中医药领域中产生了中药纳米化这一新的结合，国内外学者都对中药纳米化的研究十分关注，纳米中药主要分为两大类：一是直接将中药原药材通过机械法将其粉碎成纳米结构；二是纳米药物载体与中药有效成分结合形成纳米药载-中药的体系。因为纳米颗粒特殊的比表面积特性，能更容易接触溶剂促进有效成分的释放、更容易穿透细胞膜实现靶性治疗，所以为了更好的提高人参皂苷的生物利用度，本发明将微米生晒参粉粉碎成纳米尺度，提高了它的生物利用度，并对其抗癌活性及安全性进行了研究。 

生晒参为五加科人参属草本植物人参(Panax ginseng C. A. Meyer) 的干燥根，有着悠久的利用过程，大量研究表明人参中最重要的有效成分是人参皂苷。人参皂苷具有抗肿瘤、抗衰老、抗病毒、抗炎、抗疲劳、组织损伤修复功能、防止神经细胞凋亡、益智、预防老年痴呆、改善心脑血管类疾病、增强机体免疫力、缓解吗啡类药物的成瘾性、美容和保健等功效。 

发明内容：

本发明公开了人参纳米粉的制备方法和表征，具体如下： 

利用机械球磨法将微米生晒参粉制备成生晒参纳米粉，改善制备工艺，通过扫描隧道电子显微镜(SEM, Hitachi, Japan)进行表征，结果显示生晒参纳米粉的最优制备工艺是：首先，将人参的个子货进行粉碎，将粉碎的材料过六号筛，得到微米生晒参粉。其次，采用干法粉碎将微米生晒参粉放入行星式球磨机配置的50ml聚四氟乙烯罐中，其中装磨球（玛瑙球）分为两种球径：Ф6mm和Ф10mm,研磨过程中的比例为5:1（50：10），装磨料为2.8960g,球料比为10：1。程序设定为转速600r/min,正、反向交替运行30min, 30h后得到生晒参纳米粉。 

纳米化前后生晒参颗粒的比较：将纳米化后的生晒参样品进行了比较，用肉眼观察到纳米化后的生晒参纳米颗粒比微米生晒参粉的颜色要浅，手感摸起来也要绵滑没有像微米生晒参粉那样可以感觉到沙粒感。而且生晒参纳米颗粒的尺寸大小在500-600nm比纳米前的颗粒（3-8μm）要小很多；表面也比较光滑，不像纳米前的微米生晒参粉表面凹凸不平，结果如说明书附图1所示。 

本发明采用超声提取和索氏提取两种方法制备了人参皂苷提取物，并通过UV-vis光度法对乙醇浓度进行了了优化，得到最优的乙醇浓度为70%，最后测定比较了纳米化前后人参总皂苷的提取率，如表1。 

超声提取法对提取人参皂苷：2.00g的微米生晒参粉和2.00g的生晒参纳米粉分别放入到两个100ml的锥形瓶中，再加入60ml的70%的乙醇水溶液，超声30min后，过滤，得到滤液，放入4℃冰箱中以备使用。 

采用索氏提取法对微米生晒参粉和生晒参纳米粉提取人参皂苷，准确称取0.5000g微米生晒参粉和0.500g生晒参纳米粉，放入索氏提取器中，加100mL 70%(V/V)乙醇，85℃提取8h, 提取液过滤，用少量提取液清洗提取器，合并提取液，减压回收乙醇，加入30mL水溶解，转移至分液漏斗中30ml水饱和的正 丁醇提取，反复三次，合并正丁醇相，减压浓缩至干，用色谱纯甲醇溶解，定容至10ml，放入4℃冰箱中保存。 

表1 UV-vis法比较纳米化前后人参皂苷提取率的测定 

采用Waters600E高效液相色谱仪，配用2487型号的紫外检测器，采用梯度洗脱方式进行，检测波长为203nm。色谱柱为Atlantis dC18 柱(5 μm, 4.6×150 mm, Waters Crop.)，柱温设为30℃，流速为1ml/min，进样体积为10μl，流动相为乙腈（A）和水（B）按不同体积比进行混合。梯度程序如表2. 

表2：HPLC-UV梯度洗脱程序表