[发明专利]制备恩拉霉素A和B盐酸盐混合物的方法

说明书

技术领域

本发明属于制药工程领域，具体涉及一种制备恩拉霉素A和B盐酸盐混合物的方法。 

背景技术

恩拉霉素(英文名Enramycin或Enduracidin)，又名恩来霉素、安来霉素、持久霉素，是一种广谱、高效、安全的新型饲料添加剂。其对革兰氏阳性菌，尤其对产生气荚膜梭菌有特效，且具有优良的促生长和改善饲料利用率的作用，被世界上许多国家推荐作为动物用抗生素促生长剂。其是由放线菌Streptomyces fungicidious NO.B5477发酵产生的一种多肽类抗生素。恩拉霉素是由包括13个不同种类的17个氨基酸分子和脂肪酸分子所组成的有机碱。据其末端脂肪酸种类不同，可分为恩拉霉素A(Enramycin A，分子式：C₁₀₇H₁₃₈Cl₂N₂₆O₃₁)和恩拉霉素B(Enramycin B，分子式：C₁₀₈H₁₄₀Cl₂N₂₆O₃₁)，结构式如下。 

市场上主要来源是先灵葆雅公司的菌丝体预混剂。 

目前恩拉霉素预混剂作为兽用促生长剂使用，都是以混合物使用，主要活性成分是A，发酵液中A和B以一定的比例生成(大约为7∶1)，混合物的纯度是指A和B的总纯度。 

中国授权专利CN 101597578B用安伯莱特XAD-4和XAD-16等大孔吸附树脂并结合溶剂、盐酸和氯化钠梯度洗脱来分离提取恩拉霉素；但其溶剂使用量高，步骤繁琐，获得的纯度未知，且树脂价格较高，对于大规模生产有限制作用。另中国发明专利申请201010213986.2用大孔弱酸性阳离子树脂分离提取恩拉霉素；但弱酸性树脂再生繁琐，且其同样使用了大量溶剂。 

因此本领域需要寻找更加简单、绿色环保和低成本的恩拉霉素制备工艺。 

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种简单、低成本的制备恩拉霉素A和B混合物的方法。该方法可以直接用于大规模生产，具有很好的商业价值。本发明可以将恩拉霉素A和B盐酸盐混合物的纯度控制在92％以上，收率60％以上。 

因此，本发明的目的是提供一种制备恩拉霉素A和B盐酸盐混合物的方法，所述方法包括以下步骤： 

1)分离含有恩拉霉素A和B的发酵液，获得菌丝体； 

2)使pH调节至2.0-4.5的抽提液与菌丝体混合，超声破碎1-3h，然后搅拌12-24h，获得混悬液，其中所述抽提液的pH用盐酸调节； 

3)充分静置2)步骤获得的混悬液，过滤获得含有恩拉霉素A和B盐酸盐的粗提液； 

4)将步骤3)获得的粗提液在30-40℃下减压真空浓缩，浓缩至原体积的1/10-1/20，获得浓缩液； 

5)将步骤4)获得的浓缩液的pH调节至8.0-9.0，并使恩拉霉素A和B盐酸盐溶解，过滤，获得上柱母液； 

6)将步骤5)获得的母液上大孔吸附树脂柱，获得含恩拉霉素A和 B盐酸盐混合物的收集液； 

7)将步骤6)获得的收集液减压真空浓缩到原体积的1/50-1/100，并冻干，获得恩拉霉素A和B盐酸盐混合物。 

步骤1)的发酵液中恩拉霉素A和B的含量比例范围约为4∶1-8∶1左右。 

另将柱层析后获得的收集液中恩拉霉素A和B盐酸盐HPLC总纯度88.0％以上的液体合并进行减压真空浓缩。 

根据本发明一个优选的实施方式，步骤1)中，所述分离为过滤或离心。 

根据本发明一个优选的实施方式，步骤2)中，所述抽提液为有机溶剂的水溶液。 

根据本发明一个优选的实施方式，所述有机溶剂选自甲醇、乙醇或丙酮。 

根据本发明一个优选的实施方式，所述有机溶剂的体积百分比为50％-84％，优选64％-80％。 

根据本发明一个优选的实施方式，步骤2)中，用盐酸调节所述抽提液的pH。 

根据本发明一个优选的实施方式，步骤2)中，所述抽提液的pH为3.0-3.5。 

根据本发明一个优选的实施方式，步骤5)中，用氢氧化钠调节获得的浓缩液的pH。 

根据本发明一个优选的实施方式，步骤5)中，用少量高浓度的甲醇、乙醇、异丙醇、二甲亚砜或丙酮与浓缩液混合使恩拉霉素A和B盐酸盐充分溶解。