[发明专利]一株反硝化聚磷菌蜡样芽孢杆菌H-hrb01及筛选方法和应用

权利要求书

1.一种反硝化聚磷菌蜡样芽孢杆菌H-hrb01，其特征在于菌株为 Bacillus cereus H-hrb01，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2012年3月27日，保藏号为CGMCC NO.5939。

2.根据权利要求1所述的芽孢杆菌H-hrb01，其特征在于经鉴定为革兰氏阳性杆菌，内生芽孢，兼性厌氧，在pH 5.0-11.0、10-45℃ 条件下生长，菌株宽度为1.0-1.2μm，长为3-5μm，无鞭毛；H-hrb01杆菌在固体培养基上生长为白色不规则菌落，表面光滑，边缘呈波浪状。

3.根据权利要求1或2所述反硝化聚磷菌蜡样芽孢杆菌H-hrb01的筛选方法，其特征在于菌株Bacillus cereus H-hrb01是稳定运行的SBR反应器缺氧段末的活性污泥中分离得到，具体筛选步骤如下：

取SBR反应器运行稳定时某周期缺氧段末的活性污泥作为分离用泥，将所取活性污泥制成菌悬液，加入到反硝化培养基中，待培养基凝固后倒置培养皿于30℃恒温培养箱中培养2～3天后，选取不同形态、菌落清晰的典型菌落，标记并挑取单个菌落在反硝化固体培养基上进行三区划线分离，重复3～4次至菌落特征一致的单菌落，最后挑取单一菌落，转接到准备好的试管斜面上以备用，所有操作均在无菌条件下进行；对己分离出来的菌株在富磷培养基中进行吸磷试验，同时辅助进行硝酸盐还原产气试验及异染颗粒染色（亚甲基蓝染色法）和PHB颗粒染色（苏丹黑染色法）检验；对于硝酸还原性为阳性并产气，菌体内又含有聚磷颗粒或PHB颗粒，在好氧或缺氧条件下能过量吸磷的细菌即为试验所需的反硝化聚磷菌种属；

反硝化培养基配制如下：柠檬酸钠 5.0g/L, K₂HPO₄ 1.0g/L, KH₂PO₄ 1.0g/L, MgSO₄·7H₂O 0.2g/L, KNO₃ 2.0g/L, 琼脂15g/L，用NaOH或者HCl调节培养基pH值至7.2，121℃高压蒸汽灭菌20min；

富磷培养基配制如下（PO₄^3--P为8mg/L）：CH₃COONa·3H₂O 3.23g/L, KH₂PO₄ 35mg/L, NH₄Cl 305.52mg/L, MgSO₄·7H₂O 91.26mg/L, CaCl₂·2H₂O 25.68mg/L, PIPES buffer 8.5g/L, 微量元素 2ml/L，琼脂 15g/L，用NaOH或者HCl调节培养基pH值至7.2，121℃高压蒸汽灭菌20min；

微量元素的组成如下（1L）：FeCl₃ 0.90g，H₃BO₃ 0.15g，KI 0.18g，CuSO₄·5H₂O 0.03g，MnCl₂·4H₂O 0.06g， ZnSO₄·7H₂O 0.12g，CoCl₂ ·7H₂O 0.15g，Na₂MoO₄·2H₂O 0.06g，EDTA 10.00g。

4.根据权利要求1所述的反硝化聚磷菌蜡样芽孢杆菌H-hrb01，其特征在于菌株Bacillus cereus H-hrb01在污水生物脱氮除磷工艺中的应用。