[发明专利]基于近红外荧光标记物的免疫层析定量检测试剂

权利要求书

1.一种近红外荧光分子免疫层析试纸，其特征在于：由依次在带有粘合剂的反应支持物上相互搭接的样品垫、结合垫、承载膜、吸水垫组成，其中，

所述的结合垫上分别用喷涂法固定了两种或多种近红外荧光标记材料标记的抗体或抗原，一种是与检测目标特异性结合的抗原或抗体，另外一种是与质控线上参照物特异性结合的抗原或抗体；

所述的承载膜为硝酸纤维素膜或尼龙膜,承载膜上分别为连接有与目标分子可以特异性结合的抗原或抗体，和连接有与目标分子和检测线固定的分子无关的抗体的质控线；

所述的检测线和质控线区域的荧光强度在检测中分别与标准抗原浓度的标准曲线相对应，完成定量检测，即可得到样品中待检测物的浓度。

2.权利要求1的近红外荧光分子免疫层析试纸，所述的近红外荧光标记材料为发射波长在650-1000nm的染料，优选为NHS活化的近红外荧光染料Dylight800。

3.权利要求1或2的近红外荧光分子免疫层析试纸，结合垫上所述的与质控线上参照物特异性结合的抗原或抗体是鸡IgY；质控线上所述的与目标分子和检测线固定的分子无关的抗体为山羊抗鸡IgY多克隆抗体。

4.权利要求1-3之一的近红外荧光分子免疫层析试纸，所述试纸应用于竞争法检测，所述检测线上固定的是小分子-BSA偶联物，所述质控线上固定的是作为参照的山羊抗鸡IgY多克隆抗体。所述结合垫上分别用喷涂法固定了两种红外荧光标记的单克隆抗体，分别是抗小分子单克隆抗体和鸡IgY。

5.权利要求1-3之一的近红外荧光分子免疫层析试纸，所述试纸应用于间接法检测，所述检测线上固定的是检测抗原，在质控线上固定的是参照物抗体，例如是山羊抗鸡IgY多克隆抗体。结合垫上分别用喷涂法固定了两种近红外荧光标记的生物分子，分别是小鼠或羊抗人抗体的第二抗体和鸡IgY。

6.权利要求1-3之一的近红外荧光分子免疫层析试纸，所述试纸应用于双抗原夹心法或双抗体夹心法检测，所述检测线上固定的是与被检测物可以特异性结合的抗原或抗体，在质控线上固定的是参照物抗体，例如是山羊抗鸡IgY多克隆抗体。结合垫上分别用喷涂法固定了两种近红外荧光标记的生物分子，分别是与被检测物可以特异性结合的抗原或抗体以及鸡IgY。

7.权利要求1-6所述的近红外荧光分子免疫层析试纸的制备方法，其主要步骤为：

1)红外荧光标记单克隆抗体和鸡IgY；

2)制作结合垫；

3)制作样品垫；

4)制作免疫层析试纸条。

8.一种利用权利要求1-6之一所述的近红外荧光分子免疫层析试纸定量检测抗原或抗体的方法，依次  包括如下步骤：

i.将抗原或抗体标准品配制成2～10倍梯度的浓度系列标准品；

ii.将上述浓度系列标准品分别用权利要求1-5之一所述的试纸进行免疫层析，利用荧光定量光谱仪分别检测检测线和质检线区域的荧光强度，制作抗原或抗体浓度的标准曲线；

iii.待测抗原或抗体用权利要求1-5之一所述的试纸进行免疫层析，利用上述的标准曲线求得抗原或抗体浓度。

9.根据权利要求8所述的荧光免疫层析试纸定量检测抗原的方法，其特征在于，所述的抗原或抗体为血红蛋白、HIV-1 gp41、HIV-2 gp36或吗啡单克隆抗体。