[发明专利]脐带血来源的树突状细胞及树突状细胞疫苗的制备方法有效
| 申请号： | 201210150716.0 | 申请日： | 2012-05-16 |
| 公开（公告）号： | CN102676455A | 公开（公告）日： | 2012-09-19 |
| 发明（设计）人： | 吴明远;史高娜;裴雪涛;李会;刘大庆;南雪;陈琳;习佳飞 | 申请（专利权）人： | 北京和泽普瑞生物科技有限公司;中国人民解放军军事医学科学院野战输血研究所 |
| 主分类号： | C12N5/0784 | 分类号： | C12N5/0784;A61K39/00;A61P35/00 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 100052 北京市大兴区中关村科*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 脐带血 来源 树突 细胞 疫苗 制备 方法 | ||
1.一种树突状细胞（DC）制备方法，其特征在于将脐带血单个核细胞用含有脐带血分离的上层血浆的培养基贴壁培养2h后，去除未贴壁细胞，向贴壁细胞中加入rhGM-CSF、rhIL-4、SCF和Flt3-L，继续培养；隔天半量换液，并补加rhGM-CSF、rhIL-4、SCF和Flt3-L以保持培养基中其浓度不变；于培养的第5天加入肿瘤特异性抗原刺激，第6天加入rhTNF-α，再继续培养1-4天，即可获得成熟的DC。
2.权利要求1所述的DC制备方法，其中，所述培养基为GT-T551淋巴细胞培养基。
3.权利要求1所述的DC制备方法，其中，所述培养基中含有0.6-10％脐带血分离的上层血浆。
4.权利要求3所述的DC制备方法，其中，所述培养基中含有1％脐带血分离的上层血浆。
5.权利要求1所述的DC制备方法，其中，所述脐带血分离的上层血浆为自体脐带血血浆。
6.权利要求1所述的DC制备方法，其中，所述肿瘤特异性抗原为乳腺癌细胞系ZR-751提取的抗原蛋白。
7.权利要求1所述的DC制备方法，其中，加入的细胞因子rhGM-CSF、rhIL-4、SCF、Flt3-L和rhTNF-α的终浓度分别为1000U/mL、500U/mL、50 ng/mL、30 ng/mL和50U/mL，肿瘤特异性抗原的终浓度为20μg/mL。
8.权利要求1所述的DC制备方法，包括下列步骤：
将分离得到的单个核细胞贴壁2h，去除未贴壁细胞；
向贴壁细胞中加入含1%自体脐带血血浆的GT-T551淋巴细胞培养基5mL，并加入rhGM-CSF 1000U/mL、rhIL-4 500U/mL、SCF 50 ng/mL和Flt3-L 30 ng/mL，置37℃ 5％CO2孵箱中继续培养；
隔天半量换液，并补加rhGM-CSF、rhIL-4、SCF和Flt3-L以保持培养基中其浓度不变；
于培养的第5天加入乳腺癌细胞系ZR-751提取的抗原蛋白20μg/mL刺激，第6天加入rhTNF-α 50U/mL，再继续培养1-4天即可获得成熟的DC。
9.权利要求1-8任一项所述的DC制备方法，其中，所分离的脐带血单个核细胞是采用密度梯度离心法，用Ficoll人淋巴细胞分离液分离新鲜人脐带血得到的。
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