[发明专利]一种杂合抗菌肽毕赤酵母工程菌制备方法及应用无效
| 申请号： | 201210149859.X | 申请日： | 2012-05-15 |
| 公开（公告）号： | CN103205370A | 公开（公告）日： | 2013-07-17 |
| 发明（设计）人： | 李本涛;李帅伟 | 申请（专利权）人： | 广州格拉姆生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N1/19 | 分类号： | C12N1/19;C12N15/62;C12N15/81;C07K19/00;A23K1/17;C12R1/84 |
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| 地址： | 510000 广东省广州市萝岗*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 抗菌 肽毕赤 酵母 工程 制备 方法 应用 | ||
1.一种杂合抗菌肽基因转化毕赤酵母工程菌，其特征是一种杂合抗菌肽基因Lfcin B_Mel转化GS115、KM71和X33等毕赤酵母菌株而制得的工程菌。
2.根据权利要求1所述的抗菌肽基因转化毕赤酵母工程菌，其特征在于所述的载体是pPICZαA、pPIC3.5K、pPIC9K、pGAPZαA等毕赤酵母表达载体。
3.根据权利要求1所述的抗菌肽基因转化毕赤酵母工程菌，其特征在于所述的基因是杂合抗菌肽基因Lfcin B_Mel，其核苷酸序列如下：TTTAAGTGTAGA AGA TGGCAATGGAGAATGAAGAAGTTGGGTGCTCCATCTATTACTTGTGTTAGAAGAGCTTTCGGTTTGCCA GCT TTG ATT TCT TGG ATC AAG AGA AAG AGACAACAA。
4.根据权利要求2所述的抗菌肽基因，其特征在于，经酵母偏爱密码子优化的DNA序列为：TTT AAGTGTAGA AGA TGGCAATGGAGAATGAAGAAGTTGGGTGCTCCATCT
ATTACTTGTGTTAGAAGAGCTTTCGGTTTGCCA GCT TTG ATT TCT TGG ATC AAG AGA AAG AGACAACAA。
5.根据权利要求2所述基因编码蛋白LFB_Mel，其特征在于，其氨基酸序列为：
FKCRRWQWRMKKLGAPSITCVRRAFGLPALISWIKRKRQQ。
6.根据权利要求1所述的抗菌肽LFB Mel制品，其特征在于，制备方法包括如下步骤：
(1)将抗菌肽基因Lfcin B_Mel经酵母偏爱密码子优化后设计引物合成基因序列；
(2)将抗菌肽基因Lfcin B克隆到表达载体pPICZαA，得到重组表达载体pPICZαA-Lfcin B_Mel；
(3)将重组表达载体pPICZαA-Lfcin B_Mel电击转化毕赤酵母GS115；
(4)在pH6.0的YPD培养基中，以终浓度为1％的甲醇，对上述重组酵母基因工程菌诱导表达5天；
(5)放料，发酵液经80℃以上高温处理后，喷雾干燥得到转抗菌肽LFB_Mel的制品。
7.根据权利要求5所述的抗菌肽LFB_Mel制品，其特征在于所叙述的抗菌肽在养殖中的应用。
8.根据权利要求5所述的抗菌肽LFB_Mel制品，其特征在于，所述及的应用是在制备饲料添加剂，促进猪的生长。
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