[发明专利]制备H因子浓缩物的方法及其药物形式的用途

说明书

本申请是分案申请，其原申请的国际申请号是PCT/FR2006/002693，国际申请日是2006年12月7日，中国国家申请号为200680052193.9，进入中国的日期为2008年8月1日，发明名称为“制备H因子浓缩物的方法及其药物用途”。 

本发明涉及H因子用于制备治疗溶血性尿毒症综合征(HUS)的药物的用途，本发明还涉及从冷冻的新鲜血浆中纯化H因子的方法，本发明还涉及由上述方法获得的H因子。 

背景技术

溶血性尿毒症综合征(HUS)以微血管溶血性贫血、血小板减少症和肾脏病变的联合出现为特征。它是3岁以下儿童的肾衰竭的主要原因。 

存在两种形式的HUS。 

典型形式的HUS出现于患者出血性腹泻发作后的夏季。在大多数病例中，典型性HUS是感染的继发症，所述感染的病原为肠道致病性大肠杆菌(Escherichia coli),特别是产生志贺菌毒素(verotoxins)的0157:H7血清型。 

除了典型形式之外，某些患者还具有一些不同的表现。非典型性HUS的出现没有前驱症状，并且具有更慢性的病程，经常可导致慢性肾衰竭。非典型性HUS可出现于任何年龄。它仅占儿童HUS病例的5%。所述综合征的临床指征归因于小血管中出现的富含血小板的微小凝块。这特别影响到肾小球，从而导致急性肾脏病症。典型性HUS通常为家族性的，但是也可能为散发性。在上述两种情况中，疾病通常产生复发性的恶化。疾病的预后较差。而且，在肾移植后复发该疾病的风险也很高，这在大多数病例中会导致对移植物的排斥。 

HUS中可并发补体减少症。 

补体在防御生物体免受病原体侵害以及炎症过程中起着关键作用。 

补体包括血浆蛋白和多种不同的细胞表面受体，以及保护宿主细胞免受自身攻击的膜调节蛋白，所述细胞表面受体中一部分存在于炎性细胞表面，另一部分存在于免疫系统的细胞表面。 

补体的血浆蛋白大约有20种，它们的功能可为酶类或结合蛋白或调节蛋白(抑制物或激活物)。 

补体可通过如图3所示的两种不同的途径被激活：常规途径和替代途径。 

在图3中，酶促步骤用粗箭头表示。框中的蛋白为调节蛋白：膜蛋白用粗体表示，循环蛋白用斜体表示(H因子就属于这一类，表示为FH)。 

常规途径由抗体与外源颗粒的结合激活。因此它要依赖于抗体。 

替代途径由微生物的入侵激活；因此它不依赖于抗体，并且在宿主抵抗细菌感染的过程中极为重要。 

H因子是一种155kDa的蛋白质，它在血浆中的浓度为110-615μg/mL。它在肝脏、巨噬细胞、成纤维细胞、内皮细胞和血小板中合成。这种蛋白的分泌形式由20个相同的亚基组成，每个亚基为60个氨基酸。H因子是补体 的替代途径中最重要的调节因子。它参与血液中免疫复合物水平的调节，因此，其生成过程和其降解过程之间为一种平衡状态。 

H因子与I因子一起使游离的和结合在细胞表面的C3b分子失活。这样，由抗原-抗体复合物和C3b补体组分结合形成的免疫复合物就不能再激活补体(组分C5-C9)后续的级联反应。 

H因子的功能主要可分为以下三种活性： 

1)首先，H因子是I因子的辅助因子。因此，H因子和I因子一起通过切割C3b的蛋白链而将补体的C3b蛋白转化为C3bi(无活性的分子)。这样无活性的C3b蛋白就不能再发挥其补体过程中的作用，也不能再参与形成C3转化酶； 

2)H因子参与与内皮细胞和血小板的结合机制； 

3)最后，H因子在补体激活的替代途径中参与预形成的C3转化酶(C3bBb)的解离。这最后一种活性直接依赖于H因子的分子完整性，已证实这一活性特别依赖于H因子中存在的asn323-asn324键的完整性。 

缺少H因子的缺陷导致了许多非典型性HUS的病例，因此导致了补体的过度激活，这表现为某些患者的肾脏组织活检中观察到的C3蛋白沉积和血流中存在的C3蛋白水平下降。 

在某些患有非典型性HUS的患者中，仅在疾病的急性期观察到C3水平降低。有很强的论据支持这一论点：在非典型性HUS的病原学中，定性和定量的H因子缺乏通常会引起C3水平的下降。(Rougier N,Kazatchkine MD,et al.,Human complement factor H deficiency associated with hemolytic uremic syndrome,J.Am.Soc.Nephrol.1998;9:2318-2326)。