[发明专利]应用径向色谱从黑木耳中分离抗肿瘤多糖组分的方法

权利要求书

1.应用径向色谱从黑木耳中分离抗肿瘤多糖组分的方法，其特征是包括如下步骤：

1）、将黑木耳放入65~70℃热水中保温浸提160~200 min，得黑木耳多糖提取液；

2）、将所述黑木耳多糖提取液浓缩，得浓缩液；所述浓缩液中碳水化合物的含量为2.5~3.0mg/ml；

在所述浓缩液中加入占浓缩液体积40~60%的Savag试剂，震荡离心后，所得的上清液为去除蛋白的多糖水溶液；

3）、在所述去除蛋白的多糖水溶液中加入体积浓度≥95%的乙醇进行醇沉，得沉淀；所述体积浓度≥95%的乙醇是去除蛋白的多糖水溶液体积的1.8~2.2倍；

将所述沉淀用体积浓度≥95%的乙醇进行清洗；得含有抗肿瘤活性的黑木耳粗多糖；

4）、将所述含有抗肿瘤活性的黑木耳粗多糖冷冻干燥，得冻干后的黑木耳粗多糖；

5）、将冻干后的黑木耳粗多糖按照1g/15~20ml的料液比溶于蒸馏水中，得样品溶液；

将样品溶液泵入径向色谱仪，样品溶液的上样量为25~50ml；选用DEAE-52纤维素作为填料；分别用以下2种洗脱剂进行洗脱：蒸馏水和浓度为0.2M的 NaCl溶液，流速均为7.5~8.5ml/min，每种洗脱剂的洗脱时间55~65min； 

6）、收集浓度为0.2M的 NaCl溶液所对应的洗脱液，依次经透析、浓缩、干燥，得到具有抗肿瘤活性的黑木耳多糖。

2.根据权利要求1所述的应用径向色谱从黑木耳中分离抗肿瘤多糖组分的方法，其特征是：所述Savag试剂由氯仿:正丁醇＝3:0.9~1.1的体积比混合而得。

3.根据权利要求2所述的应用径向色谱从黑木耳中分离抗肿瘤多糖组分的方法，其特征是：所述步骤6）为：收集浓度为0.2M的 NaCl溶液所对应的洗脱液，用截留分子量为7000~9000Da的半透膜透析20~28h，再用旋转蒸发仪浓缩，直至所得的浓缩液为原体积的10%~12%；再冷冻干燥至恒重。

4.根据权利要求2或3所述的从应用径向色谱从黑木耳中分离抗肿瘤多糖组分的方法，其特征是：

所述步骤1）的浸提中：黑木耳与所述热水的料液比为：1g/20~25ml；

所述步骤2）的浓缩为用旋转蒸发仪浓缩。

5.根据权利要求4所述的应用径向色谱从黑木耳中分离抗肿瘤多糖组分的方法，其特征是：

所述步骤2）和步骤6）的旋转蒸发仪浓缩均为：真空度≤110Pa，温度为39~42℃；

所述步骤4）和步骤6）的冷冻干燥的真空度≤80Pa，温度为-45~ -55℃。

6.根据权利要求5所述的应用径向色谱从黑木耳中分离抗肿瘤多糖组分的方法，其特征是：所述步骤4）和步骤6）的冷冻干燥前，先于-70~ -80℃快速冷冻3.5~4.5h。

7.如权利要求1~6任一方法分离而得的黑木耳多糖，其特征是结构式为：

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