[发明专利]一种纯化水飞蓟素的新方法

权利要求书

1.一种利用生物破壁、微波预处理得油，再经微波逆流提取以及大孔树脂纯化技术，得到高纯度水飞蓟素的方法。其步骤如下：

(1)生物破壁：干燥水飞蓟籽浸湿，加入适量纤维素酶、半纤维素酶溶液，保温酶解60min，除掉包裹在籽皮外壳的纤维素、半纤维素、果胶片断和蛋白质膜，使被包裹的油脂细胞游离出来，提高油脂提取率。

(2)预处理脱油：将水飞蓟籽粉碎过30-60目筛，加入4-6倍石油醚(沸程60-90℃)溶液，进行微波预处理，微波功率在300～600W，频率4000～8000MHz，萃取时间300～400s，萃取温度为50～60℃，回收石油醚，得到水飞蓟油；

(3)微波逆流提取：脱油后的水飞蓟籽粉用80-85％的乙醇结合微波逆流提取，正向进料，反向进水，物料与水的流动为逆向连续动态流动。提取温度50～60℃，时间60-80min，400～600W，频率5000～8000MHz，渣经出渣螺旋输送器强制推动至出渣口而排出，出渣螺旋同时对渣进行行挤压，将渣中残留液挤出，提高提取液得率，离心过滤，回收乙醇。

(4)等电点沉淀：由于富含酸性氨基酸，蛋白质等电点主要分布在中性偏酸范围内，用盐酸调节PH至6-6.5，析出蛋白质沉淀，分离蛋白质，再用NaO调节PH值在9-10之间；

(5)大孔树脂吸附：将水飞蓟碱溶液上经过预处理的大孔树脂吸附，使吸附物单，树脂型号为S-8、AB-8、DA-201、NKA-9树脂，树脂柱的高径比为8∶1-15∶1；

(6)酸水洗脱：在常温常压下，以0.5-1BV/h流速，用PH为2的磷酸溶液洗脱树脂，洗脱体积为1-6BV；

(7)乙醇洗脱：在常温常压下，以2-4BV/h流速，用70％-95％的乙醇水溶液洗脱树脂，洗脱体积为3-1BV；

(8)减压干燥：收集乙醇洗脱液，碱压浓缩，回收乙醇，真空干燥，微粉化，得到水飞蓟素。

2.根据权利要求1所述的利用生物破壁、微波预处理得油，再经微波逆流提取以及大孔树脂纯化技术，得到高纯度水飞蓟素的方法。其特征是：在所属的步骤(1)中，破除籽皮外壳的纤维素、半纤维素、果胶片断和蛋白质膜采用的生物酶是纤维素酶、半纤维素酶，保温酶解时间60min。

3.根据权利要求2所述利用生物破壁、微波预处理得油，再经微波逆流提取以及大孔树脂纯化技术，得到高纯度水飞蓟素的方法。其特征是：在所属的步骤( 2)中，水飞蓟籽粉末目数为30-60目，萃取溶剂是石油醚，加量是原料的4-6倍。

4.根据权利要求3所述的利用生物破壁、微波预处理得油，再经微波逆流提取以及大孔树脂纯化技术，得到高纯度水飞蓟素的方法。其特征是：在所属的步骤(2)中，微波预处理功率300～600W，频率4000～8000MHz，萃取时间为300～400s，萃取温度50～60℃。

5.根据权利要求4所述的利用生物破壁、微波预处理得油，再经微波逆流提取以及大孔树脂纯化技术，得到高纯度水飞蓟素的方法。其特征是：在所属的步骤(3)中，水飞蓟籽粉用微波逆流提取，正向进料，反向进水，物料与水的流动为逆向连续动态流动，提取溶剂为80-85％的乙醇

6.根据权利要求5所述的利用生物破壁、微波预处理得油，再经微波逆流提取以及大孔树脂纯化技术，得到高纯度水飞蓟素的方法。其特征是：在所属的步骤(3)中，微波提取温度50～60℃，时间60-80min，功率为400～600W，频率为5000～8000MHz。

7.根据权利要求6所述的利用生物破壁、微波预处理得油，再经微波逆流提取以及大孔树脂纯化技术，得到高纯度水飞蓟素的方法。其特征是：在所属的步骤(4)中，蛋白质等电点PH值为6-6.5，NaOH碱水PH值调节在9-10。

8.根据权利要求7所述的利用生物破壁、微波预处理得油，再经微波逆流提取以及大孔树脂纯化技术，得到高纯度水飞蓟素的方法。其特征是：在所属的步骤(5)中，大孔树脂型号为S-8、AB-8、DA-201、NKA-9树脂中的一种，树脂柱的高径比为8∶1-15∶1。

9.根据权利要求8所述的利用生物破壁、微波预处理得油，再经微波逆流提取以及大孔树脂纯化技术，得到高纯度水飞蓟素的方法。其特征是：在所属的步骤(6)中，用磷酸溶液做洗脱剂，流速为0.5-1BV/h，PH值为2，洗脱体积为4-6BV。

10.根据权利要求9所述的利用生物破壁、微波预处理得油，再经微波逆流提取以及大孔树脂纯化技术，得到高纯度水飞蓟素的方法。其特征是：在所属的步骤(7)中，用70％-95％的乙醇为洗脱剂，流速2-4BV/h，洗脱体积为3-4BV。