[发明专利]预防人参重茬病益生菌菌剂的制备方法

权利要求书

1.预防人参重茬病益生菌菌剂的制备方法，包括发酵步骤，是将抗重茬病益生菌菌剂的生产菌种接种于含有碳源、氮源、无机盐和水的无菌培养基中进行发酵，其特征在于所述的发酵过程是在30-37℃、pH值为7.2-7.6的条件下进行的混合好氧发酵，生产菌种选用枯草芽孢杆菌CGMCC1.1700(Bacillus subtilis)，地衣芽孢杆菌CGMCC1.91(Bacillus licheniformis)，多粘芽孢杆菌CGMCC1.516(Paenibacillus polymyxa)，粪链球菌CGMCC1.101(Streptococcus faecium)，热带假丝酵母CGMCC2.1397(Candida tropicalis)，淡紫拟青霉CGMCC3.4034(Paecilomyces lilacinus)，细黄链霉菌CGMCC4.891(Streptomyces microflavus)，金龟子绿僵菌CGMCC3.5672(Metarhiziumanisopliae)8株菌；将发酵终产物吸附、固定化于草炭上制成的菌剂。

2.根据权利要求1所述的预防人参重茬病益生菌菌剂的制备方法，其特征在于，所述的灭菌培养基以可溶性淀粉培养基为基本培养基，可溶性淀粉培养为：可溶性淀粉20.0g，硝酸钾1.0g，磷酸氢二钾0.5g，硫酸镁0.5g，氯化钠0.5g，硫酸亚铁0.01g，蒸馏水1000mL，pH值7.2-7.6；其中碳源选用玉米粉或可溶性淀粉中的一种，氮源选用可溶性淀粉与硝酸盐的混合或玉米粉与硝酸盐的混合中的一种。

3.根据权利要求1或2所述的预防人参重茬病益生菌菌剂的制备方法，其特征在于所述的无菌培养基中还添加占培养基总质量0.5％的腐植酸。

4.根据权利要求1所述的预防人参重茬病益生菌菌剂的制备方法，其特征在于所述的发酵工程过程包括下列工艺步骤：

A、将保存的各斜面菌种先用平板划线法活化后，挑取单菌落，分别经试管、三角瓶逐级扩大培养制成一级种子液(每株菌各600mL)；

B、将A步骤中制备的一级种子液进行等质量混配，转接于二级扩大培养液，以5％-10％的接种量接入发酵培养基，进行混合好氧发酵，制备成二级种子液；

C、将B步骤中制备的二级种子液转接于三级扩大培养液：以5％-10％的接种量接入发酵培养基进行好氧发酵制成发酵终产物；

发酵终点用分光光度法测定以660nm波长吸光值最大或用血球计数板显微计数法以菌群数最多为发酵终点；

其中步骤B、C的发酵培养基中的可溶性淀粉采用等质量的玉米粉替代，发酵培养基中加入占培养基总质量0.5％的腐植酸；发酵过程中培养温度为30-37℃、pH值7.2-7.6、发酵时间12-24h，通风量为8-10m³/h、搅拌转速为200-300r/min。

5.根据权利要求4所述的预防人参重茬病益生菌菌剂的制备方法，其特征在于所述的A步骤一级种子的制备过程中的培养基采用可溶性淀粉培养基，培养基的pH值7.2-7.6；培养条件为：温度为30-37℃、发酵时间12-24h，转速为200-300r/min。

6.根据权利要求4所述的预防人参重茬病益生菌菌剂的制备方法，其特征在于所述的A、B、C步骤中的培养基的灭菌条件是：压力0.1Mpa、温度121℃、时间30min。

7.根据权利要求1所述的预防人参重茬病益生菌菌剂的制备方法，其特征在于所述的载体选用占发酵终产物总质量4-5倍的草炭，将发酵终产物-菌液直接喷洒、搅拌于载体上，制备成固体菌剂。

8.根据权利要求1或7所述的发酵菌剂的制备方法，其特征在于将吸附、固定化于草炭上制成的发酵固体菌剂密封于内衬聚乙烯的包装袋内。