[发明专利]检测I型鸭肝炎病毒的环介导等温扩增试剂盒及应用

权利要求书

1.检测I型鸭肝炎病毒的环介导等温扩增引物组，由引物1、引物2、引物3和引物4组成，所述引物1、所述引物2、所述引物3和所述引物4的核苷酸序列分别为序列表中的序列1、序列2、序列3和序列4。

2.根据权利要求1所述的检测I型鸭肝炎病毒的环介导等温扩增引物组，其特征在于：所述引物组中所述引物1、所述引物2、所述引物3和所述引物4的摩尔比为1∶1∶4∶4。

3.检测I型鸭肝炎病毒的环介导等温扩增试剂，包括反转录酶、链置换型DNA聚合酶、Mg²⁺、甜菜碱、dNTPs和权利要求1或2所述的引物组。

4.根据权利要求3所述的检测I型鸭肝炎病毒的环介导等温扩增试剂，其特征在于：所述引物1、所述引物2、所述引物3、所述引物4、所述dNTPs、所述Mg²⁺、所述链置换型DNA聚合酶、所述反转录酶和所述甜菜碱在所述扩增试剂中的配比为0.2μM∶0.2μM∶0.8μM∶0.8μM∶0.8mM∶6mM∶8U∶10U∶0.8M。

5.根据权利要求3或4所述的检测I型鸭肝炎病毒的环介导等温扩增试剂，其特征在于：所述反转录酶为AMV反转录酶或M-MLV反转录酶；所述链置换型DNA聚合酶为Bst DNA聚合酶。

6.检测I型鸭肝炎病毒的环介导等温扩增试剂盒，含有下述a）和b）：

a）阳性对照质粒和/或阴性对照；

b）权利要求1或2所述引物组，或权利要求3-5中任一所述扩增试剂。

7.根据权利要求6所述检测I型鸭肝炎病毒的环介导等温扩增试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中还包括荧光显色剂。

8.根据权利要求6或7所述检测I型鸭肝炎病毒的环介导等温扩增试剂盒，其特征在于：所述荧光显色剂为荧光染料SYBR GREEN I；

所述阳性对照质粒为pTP-TS1：DHAV-1，其构建方法包括如下步骤：

1）提取I型鸭肝炎病毒为DHAV-1-SD株的RNA，利用由序列表中序列5和序列6所示DNA片段组成的引物对进行反转录PCR；所述DHAV-1-SD株在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC No.3746；

2）将步骤1）所得的PCR产物与pTP-TS1载体连接，得到所述阳性对照质粒pTP-TS1：DHAV-1。

9.权利要求1或2所述检测I型鸭肝炎病毒的环介导等温扩增引物组在制备检测或辅助检测I型鸭肝炎病毒试剂或试剂盒中的应用。

10.权利要求1或2所述引物组，或权利要求3-5中任一所述试剂，或权利要求6-8中任一所述试剂盒在鉴定和/或辅助鉴定待测样品中是否含有I型鸭肝炎病毒中的应用，所述应用中利用权利要求1或2所述引物组，或权利要求3-5中任一所述试剂，或权利要求6-8中任一所述试剂盒对待测样品进行环介导等温扩增反应；所述环介导等温扩增反应在如下条件下进行：60℃-65℃恒温反应1h，优选为63℃恒温反应1h；

所述待测样品来自健康的动物或死亡的动物或空气。