[发明专利]利用大肠埃希氏菌BA305发酵生产丁二酸的方法无效
| 申请号： | 201210142752.2 | 申请日： | 2012-05-10 |
| 公开（公告）号： | CN102649970A | 公开（公告）日： | 2012-08-29 |
| 发明（设计）人： | 姜岷;梁丽亚;刘嵘明;马江锋;陈可泉;韦萍 | 申请（专利权）人： | 南京工业大学 |
| 主分类号： | C12P7/46 | 分类号： | C12P7/46;C12R1/19 |
| 代理公司： | 江苏致邦律师事务所 32230 | 代理人： | 樊文红 |
| 地址： | 211816 江苏省南京市浦口*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 利用 大肠 埃希氏菌 ba305 发酵 生产 丁二酸 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种利用大肠埃希氏菌（Escherichia coli）BA305发酵生产丁二酸的方法，其特征在于循环利用重组大肠杆菌细胞生产丁二酸：
（1）利用重组大肠杆菌采用两阶段发酵生产丁二酸
用LB培养基活化菌体，将大肠埃希氏菌 BA305接种入发酵罐，发酵培养基为LB培养基并添加碳源，通入空气或纯氧进行有氧培养，当有氧培养菌体OD600至0.4～0.6用0.3 mM的IPTG诱导，继续有氧培养15h至OD600=19，停止通入空气或纯氧，通入CO2并添加碳源进行厌氧发酵产酸，同时添加中和剂调控pH值6.4-6.8；
（2）当步骤（1）的培养基中测定无残糖时，两阶段发酵结束；通过无菌离心或无菌膜过滤获得菌体细胞，并将菌体细胞继续加入新鲜LB培养基及碳源，重复厌氧发酵丁二酸的步骤。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的中和剂为碱式碳酸镁、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾、碳酸氢钾。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的碳源为葡萄糖、木糖、阿拉伯糖、果糖或者其组合。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的碳源为玉米芯水解液、稻草秸秆水解液、糖蜜水解液或者甘蔗渣水解液。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的步骤（2）中测定无残糖的标准为：菌体细胞碳源的消耗速率下降至0.6 g/(L·h)。
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