[发明专利]一种基于HBc和EV71 VP4的手足口病疫苗及其制备方法与应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种手足口病疫苗及其制备方法与应用，特别涉及一种将EV71 VP4蛋白整合到HBc中制备而成的手足口病疫苗及其应用。 

背景技术

病毒样颗粒（virus-like particle，VLP）是指由一个或多个结构蛋白组装而成的不含有病毒核酸的空心颗粒，保留了与天然病毒粒子相似的空间构型和抗原表位，具有很强的免疫原性。病毒样颗粒疫苗的出现为研发新型安全有效的疫苗提供了一个新的契机。乙肝病毒核心颗粒（HBc）因其在目前已知的几乎所有同源、异源表达系统，包括细菌中的高水平表达、高效的颗粒自组装能力及高强度的免疫原性，一直被视作分析展示外来肽链的最灵活也是最有希望的模型。 

手足口病是全球性传染病（hand foot and mouth disease,HFMD），世界大部分地区均有此病流行的报道。人类是本病的主要传染源，主要是通过人群间的密切接触进行传播。青少年和成年人大多通过隐性感染已获得相应免疫能力。因此，患者主要集中在10岁以下儿童，其中5岁以下儿童比例最高。可引起发热和手、足、口腔等部位的皮疹、溃疡，个别患儿可引起心肌炎、肺水肿、病毒性脑炎等致命性并发症（石燕.小儿手足口病诊治概述(综述)[J].中国城乡企业卫生,2009,(1).）。2010年卫生部的报告显示截至6月22日，全国即已累计报告手足口病病例987779例。重症15501例，死亡573例。仅半年时间重症及死亡人数已超过2009年全年的人数。自2008年起，我国已把手足口病列为丙类传染病，并要求24h内上报卫生部。手足口病的疯狂流行给我国人民身体健康、甚至生命安全，构成了严重威胁。凸显了寻找有效的预防手段和方法的重要性和紧迫性。 

引起手足口病的病毒很多，其中以柯萨奇病毒A16型（Coxsackievirus A16，CoxA16）及肠道病毒71型（enterovirus 71，EV71）最为常见。通常情况下，EV71与CoxA16引起的手足口病在临床症状等方面难以区别，但EV71易致无菌性脑膜炎、脑干脑炎和脊髓灰质炎样麻痹等多种神经系统相关性疾病，可危及生命。 

肠道病毒71型（enterovirus 71，EV71）属于小RNA病毒科（Picornaradae）肠道病毒属（Enterovirus）的成员。EV71病毒由外层的衣壳和RNA核心构成。衣壳蛋白组成复杂，首先由VP1、VP2、VP3和VP4四种衣壳蛋白各单分子构成原聚体，再由5个原聚体拼装成具有五聚体样结构的亚单位，60个亚单位通过各自的结构域相互连接，形成病毒的衣壳，为二十面体立体对称的球形结构。四种结构蛋白中，VP1、VP2和VP3裸露于病毒颗粒的表面，而VP4则包埋在病毒颗粒衣壳内侧与RNA核心紧密 连接。因而传统意义上认为病毒的抗原决定簇基本上位于VP1~VP3上（Cardosa M J,Perera D,Brown B A,et al.Molecular epidemiology of humanenterovirus 71 strains and recent outbreaks in the Asia-Pacific region:comparative analysis of the VP1 and VP4 genes[J].Emerg Infect Dis,2003,9(4):461-468.）。所以目前尚没有将VP4蛋白作为靶抗原研制EV71疫苗的相关报道。 

发明内容

本发明的一个目的是提供一种抗肠道病毒71型感染的多肽。 

本发明所提供的多肽命名为HBc-VP4-N20，其氨基酸序列如序列表中序列1所示。 

序列1由169个氨基酸组成，其中第79-98位为EV71 VP4蛋白自N末端起前20个氨基酸，其余的序列为全长HbcAg蛋白的编码序列。 

所述多肽的衍生物也属于本发明的保护范围。所述衍生物具体EV71 VP4蛋白自N末端起前20个氨基酸，命名为VP4-N20，其氨基酸序列如序列表中序列2所示。 

其中，序列2由20个氨基酸组成。 

所述多肽或所述衍生物在制备下述任一产品中的应用也属于本发明的保护范围： 

a）重组病毒样颗粒； 

b）中和肠道病毒71型的产品； 

c）预防和/或治疗手足口病的产品； 

d）以a）所述重组病毒样颗粒为活性成分的预防性疫苗； 

所述重组病毒样颗粒由所述多肽在生物体内自组装而成。