[发明专利]一种检测磺胺类药物的试纸及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测磺胺类药物的试纸及其应用，具体涉及一种用于检测磺胺类药物的胶体金试纸，其特别适用于化妆品中磺胺类药物残留的检测。

背景技术

磺胺类药物是具有对氨基苯磺酰结构的一类药物的总称，用于预防和治疗细菌感染性疾病，具有抗病原体范围广、化学性质稳定、使用方便、易于生产等特点，其抑菌作用是通过干扰细菌的叶酸代谢而抑制细菌的生长繁殖。临床研究表明，磺胺类药物具有一定的祛痘、抗粉刺、除螨等功效。但由于磺胺类药物在体内的作用时间和代谢时间较长，长期使用可能导致在人体中蓄积，进而对人体机能产生危害，并导致病原体产生抗药性。因此，我国《化妆品卫生标准》、《化妆品卫生规范》、欧盟化妆品规程（Council Directive 76/768/EEC）、日本药事法（Pharmaceutical Affairs Law）中均明确规定了磺胺类药物为化妆品组分中的禁用物质。

关于磺胺类药物免疫方法检测的研究报道主要集中在食品样品方面，而化妆品中磺胺类药物的检测方法主要有高效液相色谱法、液相色谱-串联质谱法等。这些方法灵敏、准确，特异性强、分离度好，可以同时测定多种药物，但需要昂贵的仪器、样品的前处理复杂、繁琐费时、检测的成本较高，不能现场操作，而且需专业人员操作，所以限制了其应用；与之相比，胶体金免疫层析法具有特异性好、灵敏度高、操作简便、检测成本低、适合于批量样品的筛选检测等优点，是理想的快速筛选手段，能够更好地满足我国化妆品企业、政府职能监管部门等开展检测工作。

发明内容

本发明的目的是提供一种灵敏度高、操作简单、成本低、检测时间短的磺胺类药物残留检测试纸。

本发明所提供的检测磺胺类药物残留的试纸，包括样品吸收垫（1）、结合物释放垫（2）、结合物释放垫（3）、反应膜（4）、吸水垫（5）和底板（8）；所述反应膜上具有包被有磺胺类药物半抗原-载体蛋白偶联物的检测线（6）和包被有兔抗羊抗抗体的质控线（7），所述结合物释放垫（2）包被有羊抗鼠抗抗体-胶体金标记物，所述结合物释放垫（3）包被有磺胺类药物单克隆抗体。

所述磺胺类药物半抗原-载体蛋白偶联物是由磺胺类药物半抗原与载体蛋白偶联得到，所述载体蛋白可为牛血清白蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白、甲状腺蛋白、人血清白蛋白。

所述磺胺类药物单克隆抗体是以磺胺类药物半抗原-载体蛋白偶联物作为免疫原制备获得，是由磺胺类药物单克隆杂交瘤细胞株E-4-4 CGMCC No.5888分泌获得；所述羊抗鼠抗抗体-胶体金标记物中的羊抗鼠抗抗体是将鼠源抗体免疫羊得到的，所述兔抗羊抗抗体是将羊源抗体免疫兔得到的。

所述样品吸收垫（1）、结合物释放垫（2）、结合物释放垫（3）、反应膜（4）、吸水垫（5）依次粘贴在底板（8）上，所述结合物释放垫（2）叠放于结合物释放垫（3）上，并且结合物释放垫1/3~1/2被覆盖于样品吸收垫下。

所述底板可为PVC底板或其他硬质不吸水的材料；所述样品吸收垫可为吸滤纸或滤油纸；所述吸水垫为吸水纸；所述反应膜可为硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜；所述保护膜为PE材质保护膜。

本发明的另一个目的是提供一种制备上述试纸的方法，其包括步骤：

1）制备包被有羊抗鼠抗抗体-胶体金标记物的结合物释放垫（2）和包被有磺胺类药物单克隆抗体的结合物释放垫（3）；

2）制备具有包被有磺胺类药物半抗原-载体蛋白偶联物的检测线和包被有兔抗羊抗抗体的质控线的反应膜；

3）将1）和2）制备好的结合物释放垫、反应膜与样品吸收垫、吸水垫和PVC底板组装成试纸。

具体地说，步骤包括：

1）半抗原制备：将4-乙酰氨基苯磺酰氯与2-氨基-4-甲基嘧啶-5-甲酸反应得到磺胺类药物半抗原；

2）将磺胺类药物半抗原与载体蛋白偶联，得到磺胺类药物半抗原-载体蛋白偶联物；

3）用磺胺类药物半抗原-载体蛋白偶联物免疫小鼠，将小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞通过融合、筛选，得到磺胺类药物单克隆杂交瘤细胞株；

4）提取小鼠IgG免疫健康山羊，得到羊抗鼠抗抗体；

5）提取山羊IgG免疫健康兔，得到兔抗羊抗抗体；

6）用柠檬酸三钠与氯金酸反应制备胶体金；

7）将步骤4）制备的羊抗鼠抗抗体加入步骤6）制备的胶体金中，得到羊抗鼠抗抗体-胶体金标记物；

8）将羊抗鼠抗抗体-胶体金标记物包被在结合物释放垫上，37℃烘1h后取出，即为结合物释放垫（2），置于干燥环境中保存备用；