[发明专利]一种木聚糖酶的发酵方法及发酵培养基

权利要求书

1.一种制备木聚糖酶的方法，其特征在于：它包括如下步骤：

ⅰ、取包含SEQ ID NO.1所示核苷酸序列的重组毕赤酵母菌，接种到YPD种子培养基上，pH为5.4~5.6，温度为29~31℃下培养，制备得到种子液；

ⅱ、取步骤ⅰ制备的种子液，以1~3％的接种量接种到酵母发酵培养基中发酵，发酵pH为5.4~5.6，发酵温度为29~31℃；

ⅲ、碳源耗尽后，饥饿0.5~1h，用甲醇诱导木聚糖酶表达，甲醇的浓度维持为0.5%（v/v），直至酶活出现下降时终止发酵；

ⅳ、收集培养物上清，分离纯化，即得到木聚糖酶。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤ⅰ所述pH为5.5，所述温度为30℃。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤ⅱ所述的接种量为2%，发酵pH为5.5，发酵温度为30℃。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤ⅱ所述的酵母发酵培养基每一升培养基包括如下成分：磷酸盐6.5g~55g、钙盐0.23~0.93g、钾盐4.55~18.2g、镁盐3.73~14.9g、氢氧化钾1.03~1.5g、生物素4.73ml、PTM1微量元素溶液4.37ml、甘油40ml。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述磷酸盐为磷酸二氢铵、磷酸二氢钾或者六偏磷酸钠。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述钙盐为硫酸钙；所述钾盐为硫酸钾；所述镁盐为七水硫酸镁。

7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：每一升培养基包括如下成分：磷酸二氢铵50g，磷酸二氢钾5g，二水硫酸钙0.93g，硫酸钾18.2g，七水硫酸镁14.9g，氢氧化钾1.5g，甘油40mL，生物素4.73mL，PTM1微量元素溶液4.37mL。

8.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：每一升培养基包括如下成分：六偏磷酸钠6.5g，二水硫酸钙0.23g，硫酸钾4.55g，七水硫酸镁3.73g，氢氧化钾1.03g，甘油40mL，生物素4.73mL，PTM1微量元素溶液4.37mL。

9.一种发酵培养基，其特征在于：每一升培养基包括如下成分：磷酸盐6.5g~55g、钙盐0.23~0.93g、钾盐4.55~18.2g、镁盐3.73~14.9g、氢氧化钾1.03~1.5g、生物素4.73ml、PTM1微量元素溶液4.37ml、甘油40ml。

10.根据权利要求9所述的培养基，其特征在于：每一升培养基包括如下成分：六偏磷酸钠6.5g，二水硫酸钙0.23g，硫酸钾4.55g，七水硫酸镁3.73g，氢氧化钾1.03g，甘油40mL，生物素4.73mL，PTM1微量元素溶液4.37mL。