[发明专利]检测水产品中氯霉素残留的试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，涉及一种液相芯片法检测水产品中氯霉素的试剂盒。本发明还提供了检测水产品中氯霉素残留的方法和上述试剂盒的应用。

背景技术

氯霉素(chloramphenicol,CAP)是从委内瑞拉链丝菌中提取制得的一类广谱抗生素，自1948年上市以来,一直是治疗伤寒、副伤寒和沙门氏菌的首选药物,并因其效高价廉,在国内外畜牧业中也广为应用。但是，随着对氯霉素临床应用的深人研究，发现长期微量摄人氯霉素，不仅使沙门氏菌、大肠埃希菌等产生耐药性，还会引起机体正常菌群失调，抑制骨髓机能,导致再生障碍性贫血和其他恶性血液病等相关疾病，严重危害着人类的健康。近年来美国、欧盟、日本等国家都规定禁止氯霉素用于食用动物，而且在出口产品中不得检出氯霉素。

我国农业部2002年《动物性食品中兽药最高残留限量》文件中明文规定该药为禁止用于所有食品的动物兽药，食品中不能检出。但是部分畜禽养殖户盲目追求经济效益、滥用CAP的现象仍然存在。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种可检测氯霉素的试剂盒，该试剂盒不仅可以实现快速、大批量检测，而且检测特异性和灵敏度高，更重要的在于它的高通量。

本发明要解决的另一个技术问题是，提供一种可检测水产品中CAP残留的方法。旨在解决兽药残留检测单一、耗时、成本高等问题，也为进一步同时检测四个兽药残留指标奠定了基础；该方法的建立可满足水产品中CAP残留检测快速、准确的要求，同时，为我国水产品兽药残留的日常监控提供一种新的适用方法。

液相芯片技术（xMAP）是一种可广泛应用于蛋白质、基因、受体/配体等多种生物反应的生物芯片技术平台，主要包括微球、探针分子、被检测物和报告分子四种成分；在微球的制造过程当中，掺入了两种不同的红色分类荧光，根据这两种荧光的比例不同，把球形基质分为100种，可以标记上100种不同的探针分子，能同时对一个样品中多达100种不同的目标分子进行检测。反应过程中，探针和报告分子都分别与目标分子特异性结合；反应结束后，使单个的微球通过检测通道，使用红、绿双色激光同时对微球上的红色分类荧光和报告分子上的绿色报告荧光进行检测，可确定所结合的检测物的种类和数量。液相芯片技术的高灵敏度、高通量、检测迅速等突出优点，对水产品中氯霉素残留进行检测，并可用于兽药残留的日常监控中。实验结果表明，通过调配微球、探针分子、被检测物和报告分子四种成分的比例，以及荧光成分的种类和比例，可以检测液体中的氯霉素。本发明在上述基础上完成。

本发明提供了一种检测水产品中氯霉素残留的试剂盒，包括抗体。所述的抗体是针对氯霉素的单克隆抗体。

所述的抗体的制备方法是以氯霉素与卵清白蛋白的偶联物作为免疫原，制备出单克隆抗体，并将之生物素化。

所述的试剂盒中的抗原为氯霉素与卵清白蛋白偶联所得到的偶联物，随后分别与液相芯片荧光微球偶联。

所述的试剂盒还包括SA-PE溶液和终止液，还可包括微球稀释液。

所述的试剂盒还包括氯霉素的标准品溶液。

所述的标准品溶液的浓度包括25ng/mL、12.5ng/mL、6.25ng/mL、3.125ng/mL、1.6ng/mL、0.8ng/mL、0.4ng/mL、0.2ng/ml和0.1ng/ml。

本发明还提供了上述试剂盒的应用，即利用该试剂盒检测水产品中氯霉素残留，包括以下步骤：

前处理待测样品；

用上述试剂盒检测样品。

所述的检测水产品中氯霉素残留的步骤依次为：包被好的微球加入处理好的氯霉素样品溶液，随后分别加入偶联有CAP的微球以及生物素化的氯霉素抗体；然后加入稀释好的SA-PE，最后加入终止液，检测荧光强度。

所述前处理待测样品的步骤包括：匀浆好的组织加入蒸馏水和乙酸乙酯；离心，移取上清，氮气吹干；残留物用正己烷溶解，再加入PBS，离心；吸除上层正己烷，取下层溶液用于检测。

所述的前处理待测样品的步骤包括：准确称取已匀浆好的组织3.0g，3ml的蒸馏水混合，再加入6mL乙酸乙酯，最大速度震荡10min；室温条件下，6000rpm离心10min；移取4mL上清到另一新的试管，60℃水浴氮气吹干，残留物用1.0mL的正己烷溶解，再加入0.5mL的PBS，漩涡振荡1min；室温条件下，6000rpm离心10min，吸除上层正己烷，取50μL下层溶液用于检测。