[发明专利]能够同时检测CymMV和ORSV的RT-PCR检测试剂盒及方法

权利要求书

1.一种能够同时检测CymMV和ORSV的RT-PCR检测试剂盒，主要包括特异性简并引物以及PCR反应试剂，其特征在于所述简并引物核苷酸序列如下：

上游引物：5’-TYAAMAMTKKCGAGAAAG-3’；

下游引物：5’-TYGKGWMCRGTGTTAAT-3’；

其中Y、M、K、W、R为简并碱基，Y为C或T，M为A或C，K为G或T，W为A或T，R为A或G。

2.一种一步RT-PCR检测CymMV和ORSV的方法，所述方法包括：

（1）提取待测兰花样品总RNA；

（2）样品总RNA经反转录获得其cDNA；

（3）以样品cDNA为模板，加入简并引物和PCR反应试剂，进行PCR扩增，扩增产物进行凝胶电泳，若电泳结果出现558bp条带，则表示样品中含有CymMV；若样品中出现825bp条带，则表示样品中含有ORSV；反之，则表示样品中不含有CymMV或ORSV；

所述简并引物核苷酸序列如下：

上游引物：5’-TYAAMAMTKKCGAGAAAG-3’；

下游引物：5’-TYGKGWMCRGTGTTAAT-3’；

其中Y、M、K、W、R为简并碱基，Y为C或T，M为A或C，K为G或T，W为A或T，R为A或G。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于所述PCR反应程序如下：94℃预变性3分钟，94℃1分钟，45℃复性1分钟，68℃延伸1分钟，循环次数为30次，68℃延伸5分钟。