[发明专利]一种阿拉伯糖诱导的表达载体及其构建方法和应用

权利要求书

1.一种DNA片段，依次包括谷氨酸棒杆菌的组成型启动子P_hom、阿拉伯糖转运蛋白基因araE、调控蛋白基因araC、调控蛋白基因启动子P_c、阿拉伯糖启动子P_BAD。

2.根据权利要求1所述的DNA片段，其特征在于：

所述谷氨酸棒杆菌的组成型启动子P_hom为序列表中序列1自5’末端第5239-5369位核苷酸所示的双链DNA片段；

所述阿拉伯糖转运蛋白基因araE为序列表中序列1自5’末端第5382-6800位核苷酸所示的双链DNA片段；

所述调控蛋白基因araC为序列表中序列1自5’末端第6821-7699位核苷酸所示的双链DNA片段；

所述调控蛋白基因启动子P_c为序列表中序列1自5’末端第7850-7878位核苷酸所示的双链DNA片段；

所述阿拉伯糖启动子P_BAD为序列表中序列1自5’末端第7975-8002位核苷酸所示的双链DNA片段。

3.根据权利要求1或2所述的DNA片段，其特征在于：

所述DNA片段的核苷酸序列为序列表中的序列1自5’末端第5239-8046位。

4.一种表达载体，为环状双链DNA分子，自5’末端至3’末端依次包括大肠杆菌ori pUC、谷氨酸棒杆菌的复制起点ori pBL1、氯霉素抗性基因cat、权利要求1-3中任一所述的DNA片段和转录终止子rrnB。

5.根据权利要求4所述的表达载体，其特征在于：

所述大肠杆菌ori pUC的核苷酸序列为序列表中序列1自5’末端第967-1539位核苷酸所示的双链DNA片段；

所述谷氨酸棒杆菌的复制起点ori pBL1为序列表中序列1自5’末端第1724-4278位核苷酸所示的双链DNA片段；

所述氯霉素抗性基因cat为序列表中序列1自5’末端第4410-5069位核苷酸所示的双链DNA片段；

所述转录终止子rrnB为序列表中序列1自5’末端第67-492位核苷酸所示的双链DNA片段。

6.根据权利要求4或5所述的表达载体，其特征在于：

在所述DNA片段的阿拉伯糖启动子P_BAD和所述转录终止子rrnB之间还包括多克隆位点，所述多克隆位点自5’末端至3’末端依次为HindIII、PstI、SalI、XbaI、BamHI、AvaI、XmaI、SmaI、EcoRI。

7.根据权利要求4-6中任一所述的表达载体，其特征在于：所述表达载体的核苷酸序列为序列表中的序列1。

8.一种制备权利要求4-7任一所述表达载体的方法，包括如下步骤：将序列1自5’末端第5239-8046位核苷酸插入pXMJ19中得到的载体。

9.权利要求4-6任一所述的表达载体在表达外源基因中的应用；

所述外源基因具体为β-半乳糖苷酶基因、upp基因、绿色荧光蛋白编码基因、odhI基因；

所述β-半乳糖苷酶基因的核苷酸序列具体为序列表中的序列2；

所述upp基因的核苷酸序列具体为序列表中的序列3自5’末端第727-1362位核苷酸；

所述绿色荧光蛋白编码基因的核苷酸序列具体为序列表中的序列4；

所述odhI基因的核苷酸序列具体为序列表中的序列5。

10.一种重组载体，为将序列表中的序列5插入权利要求4-6任一所述的表达载体中得到的载体；

或含有所述重组载体的重组菌；

或所述的重组菌在制备谷氨酸中的应用。