[发明专利]一种抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒增殖的microRNA及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV)增殖的microRNA及其应用。

背景技术

猪繁殖与呼吸综合症（porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS），又称为猪蓝耳病，是由PRRS病毒（PRRS virus,PRRSV）引起的猪的一种高发传染病，可引起母猪的繁殖障碍、各年龄猪发生呼吸道症状以及仔猪死亡，此外还可以导致免疫抑制从而诱发继发感染，对全世界的养猪业都造成了巨大的经济损失。该病在1987年首次发现于美国，而后迅速传播到加拿大及欧洲各地，如今这种疾病已经传播到世界各地。尤其是2006年下半年以来，我国25个省份爆发了由毒力变异的高致病性PRRSV毒株（H-PRRSV）为主要病原的“猪高热病”（HP-PRRS），本病的传染性极强，一旦感染，会引起妊娠母猪早产、流产、死胎、弱胎和木乃伊胎，导致公猪种用性能下降，加剧病情，死亡率升高，给我国的养猪业造成严重的经济损失。

PRRSV属于动脉炎病毒科动脉炎病毒属，根据病毒抗原的抗原性、基因组及致病性差异，PRRSV可分为2个型，即欧洲型（I型，以LV株为代表）和美洲型（II型，以VR2332株为代表）。目前在我国流行的主要是II型毒株。该病毒的基因组大约长15.4k bp,含有至少10个开放阅读框:ORF1a/1b,ORF2a/2b,ORF3-4,ORF5/5a,ORF6-7，分别编码病毒的非结构蛋白nsp1-14，Gp2a/E，Gp3，Gp4，Gp5/Gp5a，M和N蛋白。

疫苗接种是当前预防PRRS的最普遍方法，国内外已有商业化的PRRS疫苗，包括弱毒疫苗和灭活疫苗。但是，弱毒疫苗在提供免疫保护的同时，还会持续散播疫苗病毒，使得病毒在猪场中循环存在，可能发生重组变异等，存在着毒力返强等不安全性问题，有时甚至引发PRRS爆发。而灭活疫苗存在着免疫剂量大、免疫次数多、免疫产生周期长，不能对非疫苗株型的病毒侵染提供免疫保护等缺点，不太适合仔猪免疫，而仔猪带毒是猪场PRRSV持续存在的重要原因。所以，研发有效抑制PRRSV感染的方法就显得尤为重要。

microRNAs（miRNA）是一种大小约21-23个碱基的单链小分子RNA，是由具有发夹结构的约70-90个碱基大小的单链RNA前体(pre-miRNA)经过Dicer酶加工后生成。它通过与其目标mRNA分子的3'端非编码区域(3'UTR)互补匹配导致该mRNA分子的翻译受到抑制，通过抑制靶基因的翻译过程或促使靶基因的mRNA降解。miRNA的合成和作用机制如下：在细胞核内编码miRNA的基因转录成pri-microRNA(pri-miRNA)。pri-miRNA在一种Drosha RNase的作用下，剪切为约70个核苷酸长度，具有茎环结构的miRNA前体(pre-miRNA)。pre-miRNA在Ran-GTP依赖的核质/细胞质转运蛋白Exportin 5的作用下，从核内运输到胞质中。在Dicer酶(双链RNA专一性RNA内切酶)的作用下，miRNA前体被剪切成21-25个核苷酸长度的双链miRNA。起初，成熟miRNA与其互补序列互相结合成所谓miRNA:miRNA*双螺旋结构(miRNA*是miRNA的反向互补序列)；随后，双螺旋解旋，其中一条结合到RNA诱导的基因沉默复合物(RNA-induced silencing complex，RISC)中，形成非对称RISC复合物(asymmetric RISC assembly)，该复合物会结合到目标靶mRNA上。在大多数情况下(例如在动物中)，复合物中的单链miRNA与靶mRNA的3'UTR不完全互补配对，从而阻断该基因的翻译过程。

发明内容

本发明的目的是提供一种抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV)增殖的microRNA及其应用。

本发明提供的microRNA为序列表的序列1所示的单链RNA。

本发明还保护序列表的序列2所示的DNA分子（编码所述microRNA的DNA分子）。

含有所述DNA分子的重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌均属于本发明的保护范围。