[发明专利]一种用超高效液相色谱法测定养血清脑颗粒中酚酸类成分含量的方法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种药物成分的分析检测方法，特别涉及一种用超高效液相色谱法测定养血清脑颗粒中4种酚酸类成分含量的方法。

背景技术：

养血清脑颗粒是天津天士力制药股份有限公司研制的现代中药制剂，并于1996年获得国家新药证书，并于1999年被列入国家基本药物目录，2000年被列入国家医保药品目录。养血清脑颗粒是由当归、川芎、白芍、鸡血藤、决明子、延胡索等11味中药组成，并经现代高科技手段提取后，加入适当辅料，经混合制粒等制剂过程制成的一种颗粒剂。该制剂具有有效成分溶出快，生物利用度高等优点。养血清脑颗粒具有养血平肝，活血通络的功效，可用于血虚肝亢所致的头痛、眩晕眼花、心烦易怒、失眠多梦等病症，在临床上具有显著的疗效。

养血清脑颗粒中的君药当归及主要成分川芎、白芍中均含有酚酸成分。近年来的研究表明酚酸类化合物不仅具有显著的抗氧化、抗自由基、抑制低密度脂蛋白的氧化以及预防心血管疾病的作用,而且具有抗癌、抗炎症和血小板凝聚等功能,在医药方面有广泛的用途。如研究表明绿原酸、阿魏酸、咖啡酸和迷迭香酸在心血管保护、抗诱变抗癌、抗血栓、抗炎、抗菌、抗病毒、利胆止血及抗氧化等方面都有明显作用，对于酚酸类化合物的检测方法主要有分光光度法、薄层色谱法、毛细管电泳法以及高效液相色谱法,文献报道，养血清脑颗粒中酚酸类化合物的检测方法可以采用高效液相色谱电化学检测(HPLC一ECD)法,该方法可以对养血清脑颗粒中没食子酸、原儿茶酸、咖啡酸和阿魏酸同时进行测定。但检测方法操作复杂，精度不高，实际操作过程中容易出现差错。目前对养血清脑颗粒中酚酸类有效成分的常规的检测方法为高效液相色谱分析法（参见：任树林，养血清脑颗粒中4种酚酸的高效液相色谱分析；药物分析杂志，2006,26（8）：1145）。但是，采用此方法分析时间较长，例如咖啡酸和阿魏酸保留时间分别约为13min和20min，不利于工业化大生产过程中对产品的快速检测，因此不利于实际生产中对养血清脑颗粒的质量评价和控制。

因此，需要提供一种养血清脑颗粒中酚酸类物质的检测方法，以加强对养血清脑颗粒的质量控制。

发明内容：

本发明涉及一种用超高效液相色谱法测定养血清脑颗粒中酚酸类成分含量的方法，该方法包括以下步骤：

步骤1、对照品溶液的制备；

步骤2、养血清脑颗粒制剂供试品溶液的制备；

步骤3、将对照品溶液和供试品溶液注入超高效液相色谱仪，得到色谱图；

步骤4、根据色谱图计算供试品溶液中4种酚酸类成分含量，

其中，检测样品采用50~100%的甲醇提取，色谱条件为采用C18色谱柱，流动相为甲酸乙腈-甲酸水溶液，检测器为二极管阵列检测器。

本发明所述的4种酚酸类成分是咖啡酸、阿魏酸、绿原酸和迷迭香酸，这些酸都是已知成分，记载在有关的药物手册中，本发明是对这4种酚酸类成分同时进行检测，以利于准确把握养血清脑颗粒的有效成分的含量。

本发明的方法，其中，步骤1对照品溶液的制备是将咖啡酸、阿魏酸、绿原酸和迷迭香酸这四种已知产品的标准对照品配制成溶液以便用于超高效液相色谱仪。

本发明所述对照品溶液的制备方法是：称取咖啡酸、阿魏酸、绿原酸和迷迭香酸这四种已知产品的标准对照品，分别用70-80%甲醇配制成200-250μg/mL的咖啡酸溶液，200-250μg/mL的阿魏酸溶液，250-300μg/mL的绿原酸溶液，200-250μg/mL的迷迭香酸溶液。

优选的配制方法是：准确称定咖啡酸、阿魏酸、绿原酸和迷迭香酸这四种已知产品的标准对照品置于10mL容量瓶中以75%甲醇定容至刻度。分别得220μg/mL咖啡酸，232μg/mL阿魏酸，271μg/mL绿原酸，219μg/mL迷迭香酸溶液，置于4℃冰箱待用。

其中步骤2、养血清脑颗粒制剂供试品溶液的制备是将养血清脑颗粒制剂配制成溶液以便用于超高效液相色谱仪。

本发明所述供试品溶液的制备方法是：称量约0.25-0.75g养血清脑颗粒制剂，用70-80%甲醇提取，提取液过滤，滤液配制成10ml的溶液。

优选的配制方法是：分别称量约0.5g各不同批次养血清脑颗粒制剂，置于10mL容量瓶中，加75%甲醇溶液定容，超声提取15min，放至室温后，以75%甲醇补足至刻度，用0.45微孔滤膜滤过，弃去初滤液取续滤液做为制剂供试品溶液。