[发明专利]超临界二氧化碳萃取红乳菇素的方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，特别涉及超临界二氧化碳萃取红乳菇素的方法。

背景技术

超临界二氧化碳萃取分离原理是在超临界状态下，将超临界二氧化碳与待分离的物质接触，使其有选择性地把极性大小、沸点高低和分子量大小的成分依次萃取出来。由于全过程不用有机溶剂，因此萃取物绝无残留溶媒，同时也防止了提取过程对人体的毒害和对环境的污染，而且二氧化碳价格便宜，容易取得，且在生产过程中循环使用。

红乳菇素（rufuslactone）是一种从红乳菇属中提取得到萜类成分，具有对植物病原菌有显著抑制作用，是一种新型的植物抗菌素，分子量284，分子结构：

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通过检索文献，红乳菇素的提取方法一般是采用有机试剂提取，浓缩后，用试剂萃取，萃取液再用硅胶柱分离。如麻兵继等人在文献“红乳菇子实体化学成分研究”公开的方法是：干燥的红乳菇子实体，经甲醇室温提取两次，合并滤液减压浓缩得到浸膏，以氯仿水分配，得到氯仿部分萃取物，氯仿部分样品拌样后上硅胶柱层析、制备薄层、Sephadex LH20纯化得到红乳菇素。还有专利（CN200710189855.3）“一种从红乳菇子实体中提取分离红乳菇素的方法”，该专利公开的方法是将红乳菇子实体干燥后粉碎，以甲醇室温浸泡提取，得到甲醇提取液，以氯仿-水系统分配萃取，回收氯仿，得到萃取液，将萃取液转入硅胶柱，然后以石油醚-丙酮系统梯度洗脱，收集洗脱液转入凝胶柱，以甲醇-氯仿系统洗脱，以薄层层析检测洗脱液，合并洗脱液中的主要组分得到红乳菇素纯品。如上所述，现有提取红乳菇素的方法存在提取效率低、方法操作复杂、污染严重等诸多技术缺陷。

发明内容

本发明的目的是解决现有技术的不足和缺陷，提供一种超临界二氧化碳萃取红乳菇素的方法。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：超临界二氧化碳萃取红乳菇素的方法，其特征在于：红乳菇干燥后，粉碎20~80目，加入萃取釜，设置温度为30~50℃、压力为10~25MPa，通入液态二氧化碳进行超临界萃取，在温度50~60℃、压力5~10MPa解析萃取物，所得萃取物用热水分散，加入大孔树脂中吸附，甲醇溶液梯度洗脱，收集洗脱减压浓缩，浓缩液用石油醚萃取，萃取液回收石油醚即得。

所述的大孔树脂可选极性或非极性树脂，型号可选D101、AB-8、ADS-21或NK-9中的一种。

所述的甲醇溶液梯度洗脱为：先用3~10倍柱体积10-60%甲醇溶液洗脱杂质，再用3~10倍柱体积70-99%甲醇溶液洗脱有效成分。

本发明的积极效果是：

1方法利用超临界二氧化碳方法萃取红乳菇素，效率高，而且无溶剂污染，所得萃取物纯度高；

2方法还利用大孔树脂方法纯化，操作步骤简单，洗脱溶剂单一，易于工业化生产。

具体实施方式

实施例1：

红乳菇原料干燥后，粉碎40目，取2g加入萃取釜中，设定萃取釜参数：萃取温度40℃、压力为10MPa，通入液态CO₂，流速为20L/h，动态萃取3h，在分离釜温度60℃、压力8MPa条件下，解析得萃取物23g。所得萃取物用热水分散，加入D101大孔树脂（树脂量200ml）柱中吸附，先用600ml60%甲醇溶液洗脱杂质，再用600ml99%甲醇溶液洗脱有效成分，收集洗脱液减压浓缩，约50ml转入分液漏斗中，加入50ml石油醚萃取，萃取3次，收集石油醚层回收试剂，得绿色油状物红乳菇素1.3g。

实施例2：

红乳菇原料干燥后，粉碎60目，取2g加入萃取釜中，设定萃取釜参数：萃取温度30℃、压力为15MPa，通入液态CO₂，流速为25L/h，动态萃取3h，在分离釜温度50℃、压力6MPa条件下，解析得萃取物28g。所得萃取物用热水分散，加入AB-8大孔树脂（树脂量200ml）柱中吸附，先用800ml50%甲醇溶液洗脱杂质，再用800ml90%甲醇溶液洗脱有效成分，收集洗脱液减压浓缩，约80ml转入分液漏斗中，加入160ml石油醚萃取，萃取2次，收集石油醚层回收试剂，得绿色油状物红乳菇素1.7g。

实施例3：