[发明专利]玉米内州萎蔫病菌的PCR检测方法及检测用引物有效
| 申请号： | 201210137802.8 | 申请日： | 2012-05-04 |
| 公开（公告）号： | CN102816835A | 公开（公告）日： | 2012-12-12 |
| 发明（设计）人： | 易建平;叶露飞;周国梁;杨赛军 | 申请（专利权）人： | 中华人民共和国上海出入境检验检疫局 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/11 |
| 代理公司： | 上海浦一知识产权代理有限公司 31211 | 代理人： | 王函 |
| 地址： | 200135 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 玉米 萎蔫 病菌 pcr 检测 方法 引物 | ||
1.一种玉米内州萎蔫病菌的PCR检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)设计引物，该引物的序列为：
PSM1：5’-cctttccgtcgtcctttc-3’（SEQ ID NO.1）或其互补链；
CM3：5’-gcatccaccgtttgctct-3’（SEQ ID NO.2）或其互补链；
(2)玉米样品中细菌DNA提取；
(3)采用步骤（1）设计的引物进行PCR检测。
2.如权利要求1所述的玉米内州萎蔫病菌的PCR检测方法，其特征在于，
步骤（2）中，所述玉米样品中细菌DNA提取具体为：玉米样品混匀后放入PBS缓冲液中，4℃浸泡过夜；过滤，滤液离心弃上清，沉淀用试剂盒提取DNA。
3.如权利要求1所述的玉米内州萎蔫病菌的PCR检测方法，其特征在于，步骤（3）中，所述PCR检测的反应体系为25μL，包括2.5μL 10×PCR buffer，2.5μLdNTP，步骤（1）上下游引物各1μL、2μL模板DNA、1.5U Taq聚合酶，加水补至25μL。
4.如权利要求1或3所述的玉米内州萎蔫病菌的PCR检测方法，其特征在于，步骤（3）中，所述PCR检测的反应程序为：94℃预变性3min；然后以94℃30s，63℃30s，72℃30s扩增35个循环；最后72℃延伸5min。
5.一种用于检测玉米内州萎蔫病菌的引物，其特征在于，其序列为：
PSM1：5’-cctttccgtcgtcctttc-3’（SEQ ID NO.1）或其互补链；
CM3：5’-gcatccaccgtttgctct-3’（SEQ ID NO.2）或其互补链。
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