[发明专利]一种检测牛组织中氟佐隆残留量的方法

说明书

技术领域

本发明属于兽药残留检测领域，具体涉及一种检测牛组织（肌肉、肝脏、肾脏和脂肪）中氟佐隆残留量的方法。

背景技术

氟佐隆作为一种昆虫发育抑制剂，在农业中应用较广，现在兽医行业也作为杀虫剂用于牛羊体外寄生虫感染的防治。目前国外关于动物组织中氟佐隆检测的方法主要有放射测定法和高效液相色谱法，但多是未公开发表。国内有关动物性组织中氟佐隆测定的方法未见报道。

发明内容

为了能检测牛组织中氟佐隆残留量，本发明提供了一种检测牛组织（肌肉、肝脏、肾脏和脂肪）中氟佐隆残留量的方法，能检测牛组织中氟佐隆的残留水平。

本发明所采用的技术方案是：一种检测牛组织中氟佐隆残留量的方法，是将牛组织样品经过提取、净化后，以乙腈-水为流动相,高效液相色谱-紫外检测法（HPLC-UVD）检测；液相色谱条件为：色谱柱，Agilent C₁₈，5μm，150mm×4.6mm i.d.；流动相，乙腈-水（68/32,V/V）；流速：1.2mL·min^-1；检测波长：260nm；柱温：25℃；进样体积：20μL。

本发明中牛组织样品中氟佐隆的提取和净化推荐使用乙腈超声波提取，Florisil固相萃取柱净化。具体操作是：将牛组织绞碎后称量，加乙腈10mL匀浆并用乙腈洗涤匀浆机刀片。乙腈匀浆液超声波提取10min后4000rpm离心10min，上清液经氮吹仪浓缩至干，加入乙腈2.0mL漩涡振荡溶解残渣。Florisil小柱加入乙腈5mL活化、平衡后，溶解残渣的乙腈溶液加至Florisil小柱柱头，收集自然流出液后，加乙腈1.0mL洗涤，收集并合并流出液，经氮气吹干。残渣用乙腈1.0mL溶解后，过0.22μm有机滤膜，供HPLC检测用。

本发明方法所测得牛组织中氟佐隆的LOD为0.005mg·kg^-1；LOQ脂肪为0.01mg·kg^-1，其他组织为0.02mg·kg^-1，能够满足关于动物性食品中氟佐隆药物残留分析的要求。

附图说明

图1是1mg·L^-1氟佐隆标准溶液色谱图。

图2是肌肉组织添加氟佐隆色谱图；a空白肌肉；b为添加0.5mg kg^-1的肌肉组织。

图3是肾脏添加氟佐隆色谱图；c空白肾脏；d为添加0.5mg kg^-1的肾脏。

图4是肝脏添加氟佐隆色谱图；e空白肝脏；f为添加0.5mg kg^-1的肝脏。

图5是脂肪添加氟佐隆色谱图；g空白脂肪；h为添加0.5mg kg^-1的脂肪。

具体实施方式

在本发明中所使用的术语，除非有另外说明，一般具有本领域普通技术人员通常理解的含义。

下面结合具体实施例，并参照数据进一步详细地描述本发明。应理解，这些实施例只是为了举例说明本发明，而非以任何方式限制本发明的范围。

在以下的实施例中，未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法。所用试剂的来源、商品名以及有必要列出其组成成分者，均在首次出现时标明，其后所用相同试剂如无特殊说明，均以首次标明的内容相同。

本发明中所涉及到的溶液百分浓度，除特别说明外均为体积百分浓度。

1.实验用牛的饲养和样品采集

选取干奶期荷斯坦奶牛2头，连续7d饲喂不含任何抗菌药物的全价饲料，自由饮水。奶牛于第8d处死，分别采集肌肉、肝脏、肾脏和脂肪组织作为空白对照样品，-20℃保存。

2.样品处理

本发明提取、净化步骤：

⑴牛组织（肌肉、肝脏、肾脏和脂肪）自然解冻后绞碎，准确称取2.0±0.05g于50mL离心管中，加乙腈10mL匀浆，并用乙腈5mL洗涤刀片，超声波提取10min后4000rpm离心10min；

⑵上清液氮吹仪浓缩至干，加入乙腈2.0mL涡旋振荡溶解残渣；

⑶Florisil小柱加入乙腈5mL活化，自然流出；

⑷溶解残渣的乙腈溶液加至Florisil小柱柱头，自然流出，收集流出液后，加乙腈1.0mL洗脱，收集并合并流出液，氮吹仪浓缩至干；

⑸加乙腈1.0mL涡旋振荡溶解残渣，过0.22μm有机滤膜后，供HPLC检测用。

3.色谱条件及色谱分离行为