[发明专利]蒙古口蘑液体发酵及发酵产物的抗肿瘤活性

说明书

技术领域：

本发明公开了蒙古口蘑液体发酵条件的优化以及发酵产物的抗肿瘤活性，并提供发酵条件的优化方法，研究表明该发酵产物对肝癌H₂₂荷瘤具有较好的抑制作用，且对免疫系统没有明显的负面影响。此方法提高了液体发酵的产量，从而解决了使用蒙古口蘑的菌丝体代替野生蒙古口蘑子实体的问题。并为预防及治疗肿瘤药开发提供依据。 

背景技术：

癌症（恶性肿瘤）是当前危害人类健康的重要疾病之一。据世界卫生组织统计，癌症已成为继心血管疾病之后的人类第二大疾病。全球每年约有600万人死于各种癌症，其中我国约130万人死于癌症，随着人口数量的增加和人口老龄化的加快，肿瘤发病率和死亡率也呈上升趋势。大型真菌入药在我国已经有两千多年的历史，世界上第一部药物专著《神农本草经》即记载了桑黄、灵芝、茯苓、雷丸、猪苓等药用真菌的药效，其具有抗肿瘤、抗病毒、降胆固醇、降血压、抗血小板凝集等活性，尤其抗肿瘤活性引人注目。 

蒙古口蘑隶属于担子菌纲（Basidiomycetes），伞菌目（Agaricales），口蘑科（Tricholomataceae），口蘑属（Tricholoma）真菌。每年夏末秋初雨后在草原上产生并且形成蘑菇圈，是我国珍稀的食用药用菌，子实体入药，性平、味甘，民间用于治疗胃气痛、溃疡、脘腹胀满、食欲不振、神经衰弱 、消化不良、腹泻、降低血压，治疗软骨病、降低胆固醇的含量、预防肝炎，还具一定的防癌抗癌作用。 

发明内容：

本发明公开了蒙古口蘑液体发酵条件的优化方法以及配方，具体如下： 

表1 第一次改良后的培养基列表 

表2  3号培养基改良后的培养基列表 

表3  4号培养基改良后培养基列表 

说明书附图的图1是蒙古口蘑液体发酵条件的第一次改良结果图，从说明书附图的图1结果中可以看出优化的三种培养基中3号的生物量明显增加（表5-6）。1号培养基中的菌丝体呈现不规则形状，2号培养基中的菌丝体形成小颗粒状，而3号培养基中的菌丝体呈现圆球形。从图1的结果选3号为基础培养基，并进行土壤的梯度与生物量量效关系实验。结果表明土壤500g的煎煮液配成的培养基的生物量可以达到5.37g/L，随着土壤的煎煮液的浓度的增加生物量增加。 

表4 改良后的菌球的生长情况 

注：1.羊粪培养基2.羊草培养基3.土壤培养基 

说明书附图的图2是土壤梯度液体发酵中的生长情况图，从图2测得生物量的大小顺序为9＞8＞7＞6＞5＞4。 

表5  3号培养基改良后的菌球生长情况 

说明书附图的图3是牛奶含量梯度培养基中的生长情况图，从图3 的牛奶的含量梯度与生物量的量效关系实验结果表明，生物量的大小顺序为13＞14＞11＞12＞10。 

表6  4号培养基改良后的菌球生长情况 

本发明公开了液体发酵产物菌球的小鼠抗肿瘤活性的研究，方法与结果如下： 

无菌条件下，取接种7d的种鼠腹水肝癌H₂₂细胞，用生理盐水制成细胞个数为1×10⁶-5×10⁶/mL的细胞悬液，以每鼠0.1mL接种于小鼠左后肢腋窝皮下，随机分组，每组10只。次日开始给药，阳性药组隔天腹腔注射环磷酰胺（20mg/kg）， 体积为0.2mL/10g，受试药组（500mg/kg，100mg/kg，）和对照组（生理盐水）灌胃给药，体积为0.2mL/10g，连续10d，第11天处死小鼠，摘取瘤块、胸腺和脾脏，分别称重。肿瘤抑制率=（对照组平均瘤重－给药组平均瘤重）/对照组平均瘤重×100%。胸腺指数为每g体重中胸腺的mg数，脾指数为每g体重中脾脏的mg数，各数值均以平均值±标准差（ ）来表示。通过软件spss 18.0统计分析数据，p<0.05说明在统计学上差异显著，p<0.01说明在统计学上差异极显著。