[发明专利]一种富含白藜芦醇葡萄果汁的制备方法

说明书

 

（一）技术领域

本发明涉及一种富含白藜芦醇葡萄果汁的制备方法，具体涉及一种利用黑曲霉发酵葡萄浆制备富含白藜芦醇葡萄果汁的方法,属生物工程领域。

（二）背景技术

葡萄有“水果皇后”之美誉，其味甜美又清爽且营养丰富，还有补益气血、强筋骨、通经络、通淋消肿、滋肾益肝等功效，因此深受人们喜爱。葡萄浆果中除含水分外，还含有约15%～30%的糖类(主要是葡萄糖、果糖和戊糖)，各种有机酸和矿物质，以及各种氨基酸、蛋白质、碳水化合物、粗纤维、胡萝卜素、硫胺素、核黄素、尼克酸、抗坏血酸等多种营养物质。现代研究发现，葡萄中还含有鞣质、类黄酮、萜类、甾类、超氧化物歧化酶(SOD)等生物活性物质，葡萄的医疗保健功效大都与这些生物活性物质的药理活性有关。研究发现，葡萄皮渣中含有丰富的多酚类物质，对人体具有特殊的保健作用，特别是葡萄皮渣中白藜芦醇成为研究的热点。白藜芦醇具有抗癌、保护心血管、抗氧化、抗自由基、抗血小板聚集、雌激素样、抗炎、对骨代谢的影响、对脂类代谢的影响等多种生理作用。但是白藜芦醇由于多数以白藜芦醇苷的形式存在于葡萄皮中，物理手段难以溶出，现有果汁饮料企业将葡萄压榨取汁后，往往弃掉皮渣物质，白白浪费了白藜芦醇这一宝贵的营养资源。

因此，开发富含白藜芦醇的葡萄果汁，对维护人类健康意义重大，还可带来巨大的经济，具有广阔的开发前景。本发明采用黑曲霉发酵葡萄浆，产生β—葡萄糖苷酶，该酶可以水解葡萄皮中白藜芦醇苷而大量释放白藜芦醇于果汁中，经过滤后制得富含白藜芦醇的葡萄果汁。

（三）发明内容

本发明目的在于提供一种富含白藜芦醇葡萄果汁的制备方法。

本发明的目的是这样实现的：本发明中所涉及的百分比除另有注明之外为质量比，本发明的产品采用这样的方法来制备的：

1．发酵菌种的选择及培养基的制备

本发明选择的发酵菌种购置于中国工业微生物菌种保藏管理中心，菌种名称、编号及培养基成分为：黑曲霉Aspergillus niger，保藏编号为CICC2204；培养基为：5°Bé麦芽汁。

2. 黑曲霉冻干菌种的制备过程

2.1原菌种的活化

分别量取0.9%的生理盐水10ml于1只试管内，经121℃灭菌20分钟冷却至28℃，将黑曲霉原菌种安瓶内的冻干菌粉末在无菌状态下全部倒入0.9%的生理盐水中，震荡使其溶解，在28℃恒温箱中静止活化30分钟，备用。

2.2扩大培养

2.2.1母发酵剂的制备

量取黑曲霉培养基100ml于1只500mL三角瓶内，121℃灭菌20分钟冷却至28℃，按培养基体积的5%接种2.1步骤中已经活化的菌种， 28℃摇床培养36小时，摇床转速为150转/分钟，作为母发酵剂。

2.2.2生产发酵剂的制备

首先配制质量百分比为10%的脱脂乳液，向脱脂乳液中加入2%的液态甘油、2%低聚木糖、2%蔗糖，121℃灭菌20分钟冷却至28℃，分别按3.5%体积比例接种母发酵剂，28℃厌氧培养48—54小时，检测生产发酵剂活菌数，当生产发酵剂活菌数≥10⁹个/ml，视同为发酵成熟，如果活菌数＜10⁹个/ml，继续培养，直至达到10⁹个/ml。

2.3黑曲霉冻干菌种的制备

将成熟的生产发酵剂在无菌条件下导入玻璃安瓶中，液面高度0.8cm—1cm，加盖瓶塞后放入-30℃冰柜速冻，冻结后将玻璃安瓶用托盘盛装，放入冻干机进行冷冻干燥，获得黑曲霉冻干菌种，用于发酵葡萄浆，黑曲霉冻干菌种添加量为葡萄浆重量的0.015%—0.02%。

需要进一步说明的是：本发明中选用的菌种购于中国工业微生物菌种保藏管理中心，这些菌的活化、冻干方法不仅仅限于本发明所述的具体方法，培养基的成分也不限于此，其它常规技术和方法都是可以的，只要可以提高菌种的活力、并将其制备成冻干粉状而方便使用即可。

3.富含白藜芦醇葡萄果汁的制备过程

　  3.1原料选择：选用果皮带色的葡萄，剔除病烂、病虫、生青果，用清水洗净。 

3.2去梗：把葡萄果粒从梳子状的枝梗上取下来。

3.3制取果浆：用滚筒式或离心式破碎机将果实压破，将含有果肉、果汁、果皮、籽实的葡萄果浆立即送入发酵罐。 

3.4灭菌：采用142℃3秒超高温瞬时灭菌机灭菌，冷却后等待发酵。