[发明专利]成熟油菜次生休眠种子RNA的提取方法

权利要求书

1.成熟油菜次生休眠种子RNA的提取方法，选用RNA plant plus reagent植物总RNA提取试剂，通过β-巯基乙醇抑制RNA酶活性、防止酚类物质氧化，应用醋酸钠去除多糖类物质对RNA的影响，并减少抽提次数，缩短提取时间， 其步骤包括：

（1）取0.1g成熟的油菜次生休眠种子放入加有液氮的研钵中，迅速磨成粉末；

（2）将步骤（1）制得的粉末加入含有RNA plant plus植物总RNA提取试剂的离心管，涡旋振荡至彻底混匀；室温静置，再加入预冷的苯酚-氯仿-异戊醇（25：24：1）混匀，4℃13000rpm离心5min，取上清液；

（3）将步骤（2）制得的上清液转移至一新离心管中，加入醋酸钠和无水乙醇，倒转2-3次混匀后冰上静置，4℃ 13000rpm离心4min，弃上清，乙醇洗沉淀，室温下干燥，用RNase-free ddH₂O溶解沉淀即得。

2.根据权利要求1所述的方法，所述步骤（2）中每百毫克油菜种子粉末中加入RNA plant plus reagent提取试剂（TIANGEN公司生产，使用前按照体积比1：4加入β-巯基乙醇与RNAplant plus reagent混合）700-1000μl。

3.根据权利要求1所述的方法，所述的步骤（2）中苯酚-氯仿-异戊醇（25：24：1）用量为400-600μl。

4.根据权利要求1所述的方法，所述的步骤（2）和步骤（3）中的静置时间为3-5 min。

5.根据权利要求1所述的方法，所述的步骤（3）中醋酸钠浓度为3mol/L、pH值为5.2，用量为60-80μl。

6.根据权利要求1所述的方法，所述的步骤（3）中无水乙醇用量为1300-1500μl。

7.根据权利要求1所述的方法，所述的步骤（3）中的乙醇洗沉淀为75%乙醇洗涤，洗涤次数为1-2次。