[发明专利]一种利用发酵废液制备生物酶的方法

权利要求书

1.一种利用发酵废液制备生物酶的方法，包括：

(1)将微生物在培养基中培养2-10天，分离获得剩余发酵废液；

(2)利用上述剩余发酵废液制得生物酶生产菌的发酵培养基；

(3)将生物酶生产菌的菌株接种到种子培养基于25-30℃，120-250r/min条件下培养24-48小时；

(4)以5-10％接种量转接至由步骤(2)制得的发酵培养基中产酶，其中加入1-10％诱导物；

(5)在25-30℃，120-250r/min条件下培养4-10天，过滤，离心得粗酶液。

2.根据权利要求1所述的一种利用发酵废液制备生物酶的方法，其特征在于：所述步骤(1)中的微生物为大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、木醋杆菌或酵母菌。

3.根据权利要求2所述的一种利用发酵废液制备生物酶的方法，其特征在于：所述大肠杆菌分离获得剩余发酵废液的具体工艺为：将大肠杆菌取1-2环接种到含有1％胰蛋白胨或蛋白胨、0.5％酵母浸膏、1％NaCl、pH7.0的培养基中，在37℃下培养24-72h后，用滤器将培养基过滤或高速离心取上清液，获得大肠杆菌发酵废液。

4.根据权利要求2所述的一种利用发酵废液制备生物酶的方法，其特征在于：所述金黄色葡萄球菌分离获得剩余发酵废液的具体工艺为：将金黄色葡萄球菌取1-2环接种到含有0.5％胰蛋白胨或蛋白胨、0.3％牛肉膏、5％NaCl、pH7.4的培养基中，在37℃下培养24-72h后，用滤器将培养基过滤或高速离心取上清液，获得金黄色葡萄球菌发酵废液。

5.根据权利要求2所述的一种利用发酵废液制备生物酶的方法，其特征在于：所述木醋杆菌分离获得剩余发酵废液的具体工艺为：将木醋杆菌取1-2环接种到含有2.5％葡萄糖、0.3％胰蛋白胨或蛋白胨、0.5％酵母提取物、pH4.0-7.0的种子培养基中，25-30℃动态培养24h制备种子液，然后按体积百分比3-15％的接种量转接到发酵培养基中，30℃静置或动态培养7-14天，取出产生的细菌纤维素，获得木醋杆菌发酵废液。

6.根据权利要求2所述的一种利用发酵废液制备生物酶的方法，其特征在于：所述酵母菌分离获得剩余发酵废液的具体工艺为：将酵母菌取1-2环接种到含有0.5％胰蛋白胨或蛋白胨、1.5％酵母浸膏、0.5％硫酸铵、2％葡萄糖、pH5-6的培养基中，在30℃下培养24-72h后，用滤器将培养基过滤或高速离心取上清液，获得酵母菌发酵废液。

7.根据权利要求1所述的一种利用发酵废液制备生物酶的方法，其特征在于：所述步骤(2)中的生物酶生产菌为里氏木霉、黑曲霉或米曲霉。

8.根据权利要求1所述的一种利用发酵废液制备生物酶的方法，其特征在于：所述步骤(2)中的发酵培养基的组分为：剩余发酵废液中，补加0-1％葡萄糖，0.1-1％蛋白胨，0.05％柠檬酸，0.015％Tween 80，2％Vogel’s medium N，pH5.0；或者是补加0.1-1％葡萄糖，0.1-1％蛋白胨，终浓度为0.05M的柠檬酸缓冲液，0.015％Tween 80，0.14％(NH₄)₂SO₄，0.2％KH₂PO₄，0.03％尿素，0.04％CaCl₂·2H₂O，0.03％MgSO₄·7H₂O，0.0005％FeSO₄·7H₂O，0.00016％MnSO₄·H₂O，0.00014％ZnSO₄·7H₂O，0.00037％CoCl₂·6H₂O，以上百分比均为重量百分比。