[发明专利]快速定量检测心肌肌酸激酶同工酶的免疫荧光试纸条组件及其制成的检测卡组件和制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及检验医学领域，特别是涉及一种快速定量检测心肌肌酸激酶同工酶的免疫荧光试纸条组件及其制成的检测卡组件和制备方法。 

背景技术

肌酸激酶(creatine kinase，CK)是一种二聚体，由M和B两个亚基组成，形成CK-MM、CK-MB和CK-BB同工酶。CK-BB存在于脑组织中，CK-MM和CK-MB存在于各种肌肉组织中。不同组织中，CK同工酶的比例不同，骨骼肌中98％～99％是CK-MM，1％～2％是CK-MB；心肌内80％左右也是CK-MM，但CK-MB占心肌总CK的15％～25％。 

血清CK-MB测定的最重要意义在于诊断急性心肌梗塞。急性心肌梗塞胸痛发作后4～6小时，病人血清CK-MB先于总活性开始升高，12～36小时达峰值；多在72小时内恢复正常。其最高值达对照组4.9～22倍以上。如果梗塞后3～4天，CK-MB仍持续不降，表明心肌梗塞仍在继续进行，如果已下降的CK-MB再次升高则提示原梗塞部位病变扩展或有新的梗塞病灶；如果胸痛患者在48小时内尚未出现CK-MB升高，或小于总活性的2，即可排除急性心肌梗塞的诊断。临床上常以CK-MB超过CK总活性的3(离子交换柱层析法)或10(免疫抑制法)倍作为急性心肌梗塞的诊断依据。用CK-MB诊断急性心肌梗塞时必须注意无论是CK-MB的绝对活性或占总活性百分率的界限值，均不适用于14岁以下的儿童，因为婴幼儿和儿童的CK-MB均高于成人。各种类型的心脏手术后可引起血清CK-MB活性增强，在并发术间或术后心肌梗塞时升高更为显著。进行性肌营养不良病人血清CK-MB亦升高。 

CK-MB分析测定有多种方法。测定其活性(U/L)的常用方法为免疫抑制分析。申请号201110073890.5提供了一种采用免疫抑制原理的肌酸激酶MB同工酶活性测定试剂及其制造方法。但是，CK-MB活性在发病后44小时的诊断阳性率仅为5％，国内报道发病后5小时的阳性率约40％，这意味着在发病64小时内有很大部分病例的CK-MB活性还没有升高，以致于造成该指标的漏诊率偏高。同时，CK-MB活性的酶易于老化，引起CK-MB活性检测降低。而血液中非典型CK、巨CK-1、CK-BB和CK-MM等都会产生干扰现象，导致结果偏高。 

一种新的检测方法采用吖啶酯作为化学发光示踪物，利用抗CK-MB单克隆抗体标记吖啶酯，抗CK-BB单克隆抗体包被磁微粒，采用双抗体夹心磁微粒化学发光免疫测定CK-MB的蛋白 (μg/L)，避免了活性测定中可能遇到(如巨CK等)的干扰，具有高度的敏感性(最低检测限＜1μg)和准确性，测定时间短(最快仅需7分钟)，适合于自动分析，已被广泛认可。但由于其检测需要昂贵的设备，使其大规模临床应用受到了限制，尤其不利于基层医院使用。 

国内现有类似的CK-MB检测方法的有关专利有：专利号ZL200720140932.1，其提供的免疫层析法定性检测CK-MB，不能定量，无法根据CK-MB含量高低对心肌梗塞确诊。 

发明内容

为克服现有CK-MB检测技术，如免疫抑制分析阳性率低，漏诊率高的缺点及前述吖啶酯检测方法设备昂贵、普及困难的缺点，根据免疫荧光技术特点和CK-MB抗原抗体系统特点，提供一种检测CK-MB快速、灵敏、特异性好的试纸条。 

本发明的一方面提供了一种快速定量检测心肌肌酸激酶同工酶的免疫荧光试纸条组件以及应用该试纸条组件制成的检测卡组件。 

一种快速定量检测心肌肌酸激酶同工酶的试纸条组件，包括试纸条和与试纸条配合使用且独立包装的铂卟啉标记特异抗体，试纸条包括底衬、依次接合在底衬上的吸水垫、包被分析膜及样品垫，该包被分析膜上设有检测线和质控线，检测线包被的特异抗体为抗心肌肌酸激酶同工酶单克隆抗体，质控线包被的特异抗体为兔IgG抗体；铂卟啉标记特异抗体为抗心肌肌酸激酶同工酶单克隆抗体和抗IgG抗体。 

优选地，所述试纸条的所述底衬一面涂覆黏胶或双面胶，用于固定所述吸水垫、包被分析膜及样品垫，其中所述包被分析膜粘附在所述底衬的中间，所述底衬的两侧分别与所述吸水垫和样品垫连接。 

优选地，所述试纸条的所述吸水垫为一种滤纸，该滤纸为吸水纸或滤油纸；所述吸水垫粘附在所述底衬上，同时所述吸水垫与所述包被分析膜重叠1-2mm连接。 

优选地，所述包被分析膜由硝酸纤维素膜组成，所述包被分析膜上喷涂抗心肌肌酸激酶同工酶单克隆抗体和兔IgG抗体。 

优选地，所述样品垫为磷酸盐缓冲液缓浸泡过的玻璃纤维膜，所述样品垫与所述包被分析膜重叠1-2mm连接。