[发明专利]一种快速定量检测肌钙蛋白T的免疫荧光试纸条组件及其制成的检测卡组件和制备方法

说明书

技术领域

本发明属于医学检验领域，具体涉及一种快速定量检测肌钙蛋白T(cTnT)的免疫荧光试纸条以及其制备与应用。

背景技术

冠心病已成为影响人群健康的主要疾病。急性心肌梗死则是造成冠心病人死亡的主要原因。如何及时地发现急性心肌梗死病人及其相应的治疗是挽救心肌梗死病人生命的关键所在。传统的诊断主要是根据典型的临床表现，心电图的改变及实验室酶学检查。但相当一部分心肌梗死病人临床表现不明显，早期心电图无明显改变。在这种情况下，心肌损伤特异性标志物的应用对心肌梗死的早期确诊就起到了关键的作用。肌钙蛋白T(Cardiac troponin T，cTnT)是一重要的心肌组织损伤特异性标识物，临床用于急性心肌梗死及其它心肌损伤性疾病的诊断。

肌钙蛋白是横纹肌的结构蛋白，由TnI、TnT和TNC三种亚单位组成。TnT是与原肌球蛋白结合的亚单位，Tnl是肌原纤维ATP酶的抑制性亚单位，TNC是钙离子结合亚单位。这三种亚单位与原肌球蛋白一起构成肌凝蛋白(Tm)-肌钙蛋白(Tn)复合体。在钙离子的诱导下，调节肌肉收缩和舒张的力量和速度。骨骼肌与心肌中的TnT和TnI是由不同的基因编码的，导致其氨基酸组成序列的差异，因此可以用免疫学的方法加以区分。TNC在骨船肌和心肌中则是相同的。

cTnT是仅存在于心肌细胞中的特异性调节蛋白，分两种形式存在：游离形式存在于细胞胞浆中，占6％～8％；结合形式存在于心肌收缩单位中肌纤维的细肌丝上，占92％～94％。当出现可逆性心肌缺血，心肌细胞尚未坏死，但细胞膜受到损伤，胞浆中的cTnT可短暂释放入血；当发生不可逆性心肌缺血，心肌细胞坏死，细肌丝降解，可导致结合池cTnT释放入血。因此不稳定型心绞痛(UAP)患者血液中cTnT仅短暂轻度升高随后恢复正常；而AMI患者血中cTnT可显著升高且维持较长时间。cTnT在心肌损伤后2～8小时释放入血，12～24小时达高峰，在血中可维持14天左右，所以它的最大有效诊断窗口宽至2小时～14天。在心肌损伤后，cTnT较cTnI更早释放入血，更易被检测到，血中浓度更高，对检测心肌损伤的价值也就可能更高。cTnT仅存在于心肌细胞中，可用免疫酶标定量法测得，对心肌损伤的诊断具高度敏感和特异性。虽然早期的测定方法不成熟，使cTnT与骨骼肌TnT有微量交叉反应，采用心脏特异和非心脏特异两种抗体测定cTnT，发现cTnT与骨骼肌TnT有1％～2％的交叉反应。检测方法改进后，采用两种均为心脏特异的单克隆抗体作为检测抗体测定cTnT时，与骨骼肌TnT的交叉反应阳性率＜0.5％。对75名无心脏病的骨骼肌损伤患者(其中33名Duchenne病，42名运动员马拉松长跑后)用第二代检测方法检测cTnT，未发现1例假阳性反应。另据Rottbauer报道，用同样的方法检测横纹肌溶解症患者或健康人马拉松长跑后，虽然他们的CK可升至正常高限的300倍，却检测不到cTnT，另1例因乙醇中毒导致严重骨骼肌损伤的患者，虽CK达35000IU/L(正常高限是200IU/L)，而cTnT却阴性。