[发明专利]一种快速定量检测C-反应蛋白的免疫荧光试纸条组件、及其制成的检测卡组件和制备方法

说明书

技术领域

本发明属于医学检验领域，尤其涉及一种快速定量检测C-反应蛋白的免疫荧光试纸条组件及其制备方法，和由免疫荧光试纸条组件支撑的检测卡组件及其制备方法。 

背景技术

C-反应蛋白(C-reactive protein，CRP)是环状五球体蛋白，属于Oligomeric钙结合蛋白，相对分子质量约120000，由5个相同的单体以非共价键构成，是炎性淋巴因子白介素-6、白介素-1，肿瘤坏死因子刺激肝脏上皮细胞合成的。由于C-反应蛋白在感染发生后6～8h即开始升高，24～48h达到高峰，高峰值可达正常的数百倍，在感染消除后其含量急骤下降，一周内可恢复正常。C-反应蛋白被公认为是最有价值的急性时相反应蛋白，它的升高可以提示许多炎症事件的发生，因此，很久以来被广泛应用于临床感染性疾病的检测。近年来有研究者发现，炎症在动脉粥样硬化的起始、形成、发展过程中扮演了重要的角色，所以C-反应蛋白这个极其灵敏的炎症指标在各种类型心血管疾病中得到了广泛的研究。 

常规C-反应蛋白检验方法可在感染或组织损伤时检测出C-反应蛋白＞10mg/L，但是，不能很好地检测出低水平(0.1～10mg/L)的C-反应蛋白变化。该水平的C-反应蛋白与心血管疾病的发生有着密切的关系，所以日益受到研究者的关注。随着一些高灵敏度检测方法的出现，低水平的C-反应蛋白也可以被检测出来，由于应用的检测方法具有较高的灵敏度，因此，这个水平的C反应蛋白又被称为较高的超敏C反应蛋白(high sensitivity C-reactive protein，hs-C-反应蛋白)。研究显示，在无明显症状的健康男性中，C-反应蛋白的升高程度与初次发生冠心病的危险性呈正相关，hs-C-反应蛋白浓度处于高值的那部分人群未来发生中风、心肌梗死、周围血管疾病的危险分别是低值的2倍(RR＝1.9，95％CI 1.1～3.3)、3倍(RR＝2.9，95％)CI 1.8～6.0)和4倍(RR＝4.1，95％CI 1.2～6.0)，并且证实不受吸烟因素的影响而独立于冠心病的其他危险因子之外。Hs-C-反应蛋白对于女性也是一个强有力的未来心血管发病的预测因子(RR＝4.4，95％CI 2.2～8.9)。hs-C-反应蛋白对于急性冠脉综合征的诊断也有十分重要的作用。不稳定性心绞痛或非ST段抬高的心肌梗死患者有hs-C-反应蛋白升高、则示来可能会发生各种不利事件，如心绞痛的再发、ST段抬高的心肌梗死或冠心病引起的死亡。 

临床实验室C-反应蛋白检测一直采用透射免疫和散射免疫方法，这些方法的参考值范围变动很大，从3mg/L到超过200mg/L。随着人们对于低水平C-反应蛋白与心血管疾病关系的 认识，这些测定方法的灵敏度远远不能满足要求，而且目前的检测方法即使使用昂贵的仪器设备和试剂，也不能同时兼顾高值和低值的检测要求。因此，建立一种检测时间短，并且检测除了能在实验室进行外，还要求能够进行床旁检测，同时对高值和低值C-反应蛋白都适用的检测方法，从而为临床提供准确的诊断依据，是十分必要的。 

目前，用来测量C-反应蛋白的免疫层析技术中所使用的标记物通常是酶、胶体金以及各种彩色微球标记物，这些标记物应用于免疫层析技术中有相同的特点：物理吸附方式标记和通过颜色判断检测结果。其中物理吸附方式标记(即疏水性和静电吸附原理)的特点使得其容易形成非特异性干扰，需要在生产工艺配方中添加非特异性干扰消除试剂，如吐温20等表面活性剂等，但使用这类试剂的同时，也容易造成基于这类标记物的假阳性或假阴性的结果。另外通过颜色判读结果在使用时必然受观察者主观影响大，尤其是弱阳性结果，且只能做出定性判断，而无法实现精确的定量判定。这些缺点大大限制了免疫层析技术在临床检测中的应用范围。 

而中国公开第102087293号专利揭示了一种全程定量检测C-反应蛋白的免疫层析试纸及其制备方法，其虽然采用了荧光定量技术，但没有明确具体的荧光材料；同时，其将荧光乳胶微粒干燥固定在结合垫上，必定会影响其在玻璃纤维素膜上的溶解和释放速度，也影响其在硝酸纤维素膜上的爬行速度，整个检测时间也要远超其要求的10秒测定时间。同时，被检测物中的C-反应蛋白与荧光乳胶颗粒标记的C-反应蛋白抗体，以及硝酸纤维素膜上固定的C-反应蛋白抗体，在10秒钟内难以形成有效的抗原-抗体反应，免疫学反应是不充分的，必将导致检测灵敏度偏低，检测线性范围窄，难以满足临床检测的需求。