[发明专利]一种用于结核杆菌目视检测引物组及其试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种生物检测试剂的研发，更具体涉及一种用于结核杆菌目视检测引物组及其试剂盒，属于分子生物学技术领域。。 

背景技术

结核病(Tuberculosis，TB)是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)引起的一种慢性人畜共患病，能够感染人和多种哺乳动物以及禽类。其中导致人类感染的结核菌大多数是人结核分枝杆菌，也有10％以上是由牛分枝杆菌引起的。各个器官都可被侵犯，但以肺器官被侵染为多见。其病理特征是在多种组织器官中形成肉芽肿和干酪样、钙化结节病变。 

据世界卫生组织(WHO)报告，目前全球已有20亿人感染结核菌，现有活动性肺结核患者约2000万，每年新发病800-1000万，每年约有300万人死于结核病，每年死于结核病的成年人多于艾滋病，疟疾和热带病死亡人数的总和。据WHO估算，到2005年全球结核病新病例将达1020万例。全球90％的结核病在发展中国家，中国结核病患者数居世界第二，仅次于印度。结核杆菌不仅感染人，也感染许多动物(见表1)尤其是奶牛。这对以奶牛业为主的发达国家造成严重经济损失。尽管一些国家已有效地控制或消灭了此病，但在有些国家和地区仍呈地区性散发和流行。我国结核病疫情严重，且分布较广。 

表1各种不同结核杆菌对人和动物的致病性 

结核病既是一个公共卫生问题，也是一个社会经济问题，对人类的公共健康构成很大威胁。因此对其快速诊断检测就至关重要。目前结核病的诊断方法主要有细菌学检测法、X射线检测法、免疫学检测法、分子生物学检测法等。目前同类技术的状况如下： 

(1)结核杆菌的细菌学检测法又分为痰涂片检测和痰结核菌培养检测。 

①痰涂片检测。优点：检查简便易行，准确性较高，痰中查出结核菌，就能确诊患了结核病。缺点：阳性率低。 

②痰结核菌培养检测。优点：结果可信度高，并能做结核菌药敏试验。缺点：耗时长，一般需耗时6-8周，应用受到限制。 

(2)X线检测法 

X线检测法的优点：可以早期发现结核病并确定病灶的部位、性质、范围，了解发病情况及用于治疗效果的判断，并且开展方便，病人乐于接受。缺点是较小的或隐蔽部位的病变较难发现，需要做胸部CT，弥补一般 X线检查的不足。 

(3)结核杆菌的免疫学检测法 

①结核菌素皮内检测法(Tuberculin skin test，TST)。TST是世界动物卫生组织(OIE)迄今为止唯一推荐的牛结核病的检测方法。该方法主要是用结核菌素、纯化蛋白衍生物(Purified Protein derivatives，PPD)对牛进行皮内接种，于72h-96h后观察接种部位皮肤的肿胀程度，以确诊牛结核病。该方法曾经在牛结核病的诊断与防治过程中发挥了重要作用，英国和欧共体的诸多国家就是利用该方法消灭和控制了牛结核病。该方法存在很多不足：由于纯化蛋白衍生物(PPD)皮肤试验个体差异较大，注射剂量和纯化蛋白衍生物(PPD)批号对牛个体反应均有差异，会呈现不同的皮肤反应，其结果以皮肤厚度的增加数为准，易造成人为误差，操作烦琐，费时费力，缺乏严格性。结核菌素试验阳性仅能表明在过去某一时间曾经发生过的一次结核菌感染，它无法证明目前的结核菌感染是否为活动的，或仅为在机体的某处有活的结核菌存在。当动物发生某些细菌或病毒的感染时，或者使用某些药物治疗及一些不明原因，也可能造成假阳性或假阴性结果。部分研究者还发现，该法存在着极强的非特异性，即在相当数量的结核菌素试验阳性牛中，既找不出特征病变，又不能分离出结核菌，或仅仅分离出非典型的分枝杆菌，重复检疫时阳性率下降，而且妊娠母牛和细胞免疫反应低下的重症患牛检出率均很低，使得该方法已成为基层检疫中捕杀政策难以执行及奶牛场难以净化的直接原因。鉴于以上不足，因此有必要开展其他的辅助诊断，以更准确地判断结核病的感染情况。