[发明专利]一种新型单宁酶及其应用

权利要求书

1.一种新型单宁酶，其特征在于，所述单宁酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。

2.如权利要求1所述的新型单宁酶的cDNA，其特征在于，所述cDNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

3.如权利要求1所述新型单宁酶的宏基因组学克隆方法，其特征在于，包含以下步骤：提取海洋淤泥总DNA并纯化，将纯化后的总DNA经BamHI酶切处理后，连接到pUC118载体上，电击转化导入大肠杆菌DH5α中建立宏基因组文库，通过高通量筛选得到阳性克隆子，经测序和BLAST比较并设计引物，从而克隆到目的片段。

4.一种包含如权利要求2所述的新型单宁酶的cDNA的表达载体。

5.一种重组单宁酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：用权利要求4所述的表达载体转化寄主细胞，培养转化体，从培养物中获得重组单宁酶。

6.如权利要求5所述的重组单宁酶的制备方法，其特征在于，所述寄主细胞是大肠杆菌。

7.如权利要求6所述的重组单宁酶的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：用权利要求4所述的目的片段经BamHI和HindIII双酶切，与pET-28a(+)载体连接，转化至大肠杆菌BL21，经IPTG诱导，得到高效可溶性表达。

8.如权利要求7所述的重组单宁酶的制备方法，其特征在于，所述的IPTG终浓度为0.4mM，诱导温度为25℃。

9.一种采用如权利要求5所述方法制备得到的重组单宁酶。

10.如权利要求9所述的重组单宁酶在降解没食子酸丙酯、单宁酸、素儿茶素没食子酸酯、表没食子儿茶素没食子酸酯、绿原酸、迷迭香酸和阿魏酸乙酯中的应用。