[发明专利]一种鸡α干扰素原核表达的高密度发酵方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物发酵领域，尤其是一种鸡α干扰素原核表达的高密度发酵方法。

背景技术

家禽肿瘤和病毒感染性疾病的有效治疗一直是困扰禽病防治的重大难题之一。鸡的免疫系统以及在病原感染或注射疫苗时所产生的免疫反应与哺乳动物相似，所以可以应用细胞因子来控制与治疗禽类疾病。目前，动物滥用抗生素作为饲料添加剂的现象日益严重，动物性食品(尤其是鸡肉)的药物残留超标，导致各种耐药菌株在人类身上不断出现，例如“超级细菌”，给人类健康带来严重威胁。鸡干扰素α蛋白制剂作为一种新型的绿色生物制品可以有效带动禽类的绿色高效养殖，具有广阔市场发展前景。

然而目前采用原核表达系统来生产鸡α干扰素存在着表达质粒容易丢失、蛋白产量低、生产成本高等问题，严重制约了其工业化应用。因此从控制发酵参数入手，通过改良发酵培养基来解决上述难题，具有非常重要的生产实践意义。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种鸡α干扰素原核表达的高密度发酵方法。

本发明所要解决的另一技术问题在于提供上述鸡α干扰素原核表达的高密度发酵方法的制备方法。

为解决上述技术问题，本发明的技术方案是：

一种鸡α干扰素原核表达的高密度发酵方法，包括以下步骤：

(1)种子活化：将表达鸡α干扰素的工程菌株大肠杆菌在固体LB培养基上活化，然后挑取一单菌落至50mL LB液体培养基中，在30～37℃，180～220rpm，培养12～24小时；再将得到的种子液按体积比1％～5％的接种量接种至LB培养基中，在30～37℃，180～220rpm，培养6～12小时，得到发酵种子液；

(2)接种：向发酵罐中填充发酵培养基，然后按体积比5％～10％的接种量将上述活化好的种子液接种至液体发酵培养基中；

(3)发酵：向发酵罐中通入空气或者空气/氧气的混合气体，通气量为2～4m³/h，发酵温度30～37℃，搅拌转数300～900rpm，溶氧控制在20％～40％，pH控制在6.8～7.4，发酵时间11～24小时，当OD_600nm＝2～4时开始补料，补料的流加速度是100～1000mL/h；

(4)诱导：当OD_600nm＝4～6时开始添加IPTG诱导鸡α干扰素的表达，最后进行蛋白纯化，得到目的蛋白。

优选的，上述鸡α干扰素原核表达的高密度发酵方法，所述发酵罐为50L发酵罐。

优选的，上述鸡α干扰素原核表达的高密度发酵方法，所述培养基组成为：

LB培养基：每升H₂O中蛋白胨10g，酵母粉5g，氯化钠10g；

发酵培养基：每升H₂O中含有葡萄糖5～10g、蛋白胨5～10g、酵母粉5～10g、KH₂PO₄ 2～4g、K₂HPO₄ 1～4g、Na₂HPO₄·12H₂O 2～7g、(NH₄)₂SO₄ 0.6～1.2g、NH₄Cl 0.1～0.3g、MnSO₄·5H₂O 0.001～0.01g、CoCl₂·6H₂O 0.004～0.01g、Na₂MoO₄·2H₂O 0.001～0.005g、ZnCl₂0.001～0.01g、CuSO₄·5H₂O 0.001～0.01g、H₃BO₄ 0.002～0.012g、FeSO₄·7H₂O 0.01～0.02g、CaCl₂·2H₂O 0.01～0.04g、MgSO₄·7H₂O 0.1～0.6g、消泡剂0.1～0.3g；

补料培养基：每升H₂O中葡萄糖120～260g、蛋白胨30～60g、酵母粉15～35g、MgSO₄·7H₂O 2～6g、NaCl 3～7g。