[发明专利]一种基于不同严谨度的用于检测DNA结合蛋白的微孔板核酸杂交ELISA方法

权利要求书

1.一种基于不同严谨度的用于检测DNA结合蛋白的微孔板核酸杂交ELISA方法，其特征在于所述方法是根据当DNA结合蛋白存在时，在高严谨洗脱条件下能增强双链DNA结合的稳定性而不被洗脱的原理，设计两条核酸序列，一条核酸序列是固定探针，含有DNA结合蛋白特异结合的核酸序列，该序列末端依据微孔板表面的化学基团进行相应的化学修饰，以便连接固定到微孔板表面；另一条核酸序列是显色探针，是与固定探针不完全互补的核酸序列，其末端依据显色系统进行相应的修饰，以便检测分析；显色探针与含DNA结合蛋白的细胞全蛋白或核蛋白抽提物与微孔板共孵育时，在高严谨洗脱条件下能够形成稳定双链而不被洗脱下来，通过末端修饰标记进行显色时有颜色显示；若不含有DNA结合蛋白，显色探针在高严谨洗脱条件下将会被洗脱下来，显色时将无颜色显示。

2.根据权利要求1所述的基于不同严谨度的用于检测DNA结合蛋白 微孔板核酸杂交ELISA方法，其特征在于所述方法包括如下步骤：

（1）准备核酸分子，包括固定探针和显色探针，均为单链核酸；

（2）将固定探针连接固定到微孔板内；

（3）将DNA结合蛋白和显色探针与微孔板共孵育；

（4）高严谨洗脱，除去未稳定结合的核酸分子；

（5）显色系统进行显色，反映DNA结合蛋白的表达和活化水平。

3.根据权利要求2所述的基于不同严谨度的用于检测DNA结合蛋白微孔板核酸杂交ELISA方法，其特征在于步骤（1）中所述核酸分子均为化学合成的单链寡核苷酸，其序列中含有DNA蛋白可识别并与之结合的核苷酸序列。

4.根据权利要求2所述的基于不同严谨度的用于检测DNA结合蛋白微孔板核酸杂交ELISA方法，其特征在于步骤（2）和（3）中所述的微孔板表面带有氨基、羧基、C12或PEG。

5.根据权利要求2所述的基于不同严谨度的用于检测DNA结合蛋白微孔板核酸杂交ELISA方法，其特征在于步骤（2）中所述将固定探针连接固定到微孔板是核酸分子末端修饰的化学基团与微孔板表面修饰的化学基团间发生的化学反应，将固定探针固定到微孔板表面。

6.根据权利要求2所述的基于不同严谨度的用于检测DNA结合蛋白微孔板核酸杂交ELISA方法，其特征在于步骤（3）中所述DNA结合蛋白包括人工表达制备的、含有DNA结合蛋白的细胞全蛋白或核蛋白抽提物。

7.根据权利要求2所述的基于不同严谨度的用于检测DNA结合蛋白微孔板核酸杂交ELISA方法，其特征在于步骤（3）中所述共孵育是核酸序列碱基互补配对和DNA结合蛋白与两条核酸分子间特异性识别并结合的过程。