[发明专利]一步法固相合成多肽的方法

权利要求书

1.一种一步法固相合成多肽的方法，其特征在于，合成多肽的所有化学反应在同一个反应器内依次连续完成，无需在活化器中低温活化保护氨基酸再转移至缩合反应器中，在进行任一保护氨基酸的缩合反应时，保护氨基酸、缩合剂先溶解在含有树脂或者肽树脂的反应混合物中，该混合物中含有挥发性有机溶剂和非挥发性有机溶剂组成的溶剂，然后利用氮气流和肽树脂充分均匀接触，并利用挥发性有机溶剂的挥发吸热将整个反应系统迅速降温至15-20℃，然后加入助缩合剂启动缩合反应，缩合反应温度控制在22-28℃。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的非挥发性有机溶剂选自DMF和DMSO中的一种或两种，所述的挥发性有机溶剂选自DCM和Et₂O中的一种或两种。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的树脂是wang树脂或Rink Amide-MBHA树脂；所述的保护氨基酸是Fmoc保护氨基酸或Boc保护氨基酸；所述的缩合反应的缩合体系包括以下几种中的任何一种，其中第1列AA表示氨基酸，最后一列表示助缩合剂，中间列表示缩合剂，列和列之间用“/”相隔：

(1)AA/HOBt/DIC

(2)AA/HOBt/DCC

(3)AA/TBTU/HOBT/DIPEA或NMM

(4)AA/HATU/HOBT/DIPEA或NMM

(5)AA/HCTU/HOBT/DIPEA或NMM

(6)AA/PyBop/HOBT/DIPEA或NMM

(7)AA/Bop/HOBT/DIPEA或NMM

(8)AA/HATU/HOAT/DIPEA或NMM

(9)AA/HATU/HOBT/DIPEA或NMM

(10)AA/HCTU/HOBt/DIPEA或NMM

(11)AA/CDI/HOBt

(12)AA/CDI/HOAT。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)在树脂上连接第一个保护氨基酸

在反应容器中，加入溶胀处理后的树脂、第一个保护氨基酸、缩合剂、挥发性有机溶剂和非挥发性有机溶剂并混合均匀，同时向反应体系中通入氮气或惰性气体使挥发性溶剂挥发并保持反应体系温度在15-20℃；加入助缩合剂启动保护氨基酸和树脂进行的缩合反应，反应温度控制在22-28℃；反应完全后抽干，将沉淀洗涤；

(2)连接第二个保护氨基酸

在步骤(1)洗涤后含有沉淀的反应容器中，加入有机溶剂和哌啶，进行脱保护基反应；反应完全后抽干，将沉淀洗涤；加入第二个保护氨基酸、缩合剂、挥发性有机溶剂和非挥发性有机溶剂并混合均匀，同时向反应体系中通入氮气或惰性气体使挥发性溶剂挥发并保持反应体系温度在15-20℃；加入助缩合剂启动保护氨基酸和肽树脂进行的缩合反应，反应温度控制在22-28℃；反应完全后抽干，将沉淀洗涤；

(3)-(n)连接第三-n个保护氨基酸(n是大于等于4的自然数，是合成的多肽的氨基酸序列中所含的氨基酸残基的数目)

在步骤(2)或步骤(n-1)洗涤后含有沉淀的反应容器中，加入有机溶剂和哌啶，进行脱保护基反应；反应完全后抽干，将沉淀洗涤；加入第三个或者第n个保护氨基酸、缩合剂、挥发性有机溶剂和非挥发性有机溶剂并混合均匀，同时向反应体系中通入氮气或惰性气体使挥发性溶剂挥发并保持反应体系温度在15-20℃；加入助缩合剂启动保护氨基酸和肽树脂进行的缩合反应，反应温度控制在22-28℃；反应完全后抽干，将沉淀洗涤；

(n+1)脱保护基和切肽

将步骤(n)洗涤后的沉淀进行脱保护基和切肽反应，将切肽反应的反应产物过滤，从滤液中分离肽。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤(1)中所述的树脂是wang树脂；所述的保护氨基酸是Fmoc保护氨基酸，所述的缩合剂是HOBt和DIC。

6.如权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤(1)中所述的树脂是Rink Amide-MBHA树脂；所述的保护氨基酸是Fmoc保护氨基酸，所述的缩合剂是HOBt和HBTU，所述的助缩合剂是DIPEA，NMM或collidine，步骤(2)中所述脱保护基反应是在肽树脂中加入哌啶的DMF溶液在22-28℃反应即可。