[发明专利]一种生产丁醇的方法

权利要求书

1. 一种生产丁醇的方法，其特征是包括以下步骤：

1) 将保存于冷冻甘油管的偶联发酵体系中的一种发酵菌株Clostridium thermocellum ATCC 27405接入装有改良GS种子培养基的血清瓶，55~65 ℃静置培养18~24 h，得到一级种子；

将偶联发酵体系中的另一种发酵菌株Clostridium beijerinckii NCIMB 8052由芽孢悬液接入装有TGY培养基的血清瓶，30~40 ℃静置培养18~24 h，得到一级种子；

所说的改良GS种子培养基是由质量体积比分别为0.1 %~0.2 %玉米棒芯、0.6 %酵母粉、0.21 % NH₄Cl、0.15 %KH₂PO₄、0.29 % K₂HPO₄、0.1 %MgCl₂、0.015 %CaCl₂、0.000125 % FeSO₄、0.1 % L-半胱氨酸、0.0002 %刃天青以及0.0004 %维生素B₁、0.002 %维生素B₆、0.0002 %维生素B₁₂、0.0004 %生物素、0.0004 %对氨基苯甲酸组成，其pH值为6.8~7.2；

所说的TGY培养基是由质量体积比分别为0.5 %蛋白胨、0.3 %酵母粉和0.1 %葡萄糖组成，其pH值为7.0~7.5；

2) 取2~12 ml C. thermocellum一级种子接种于含400 ml改良GS培养基的厌氧发酵罐中，发酵转速为100~150 r·min^-1，培养温度55~65 ℃，发酵培养初始采用3~5 mol·L^-1氢氧化钠控制发酵pH 6.8~7.2，至发酵产H₂和CO₂混合气体积达到100~250 mL时，采用3~5 mol·L^-1氢氧化钠控制发酵pH在6.4~6.8；

所说的改良GS培养基是由质量体积比分别为5 %~6.5 %玉米棒芯、0.6 %酵母粉、0.21 % NH₄Cl、0.15 %KH₂PO₄、0.29 % K₂HPO₄、0.1 %MgCl₂、0.015 %CaCl₂、0.000125 % FeSO₄、0.1 % L-半胱氨酸、0.0002 %刃天青以及0.0004 %维生素B₁、0.002 %维生素B₆、0.0002 %维生素B₁₂、0.0004 %生物素、0.0004 %对氨基苯甲酸组成，其pH值为6.8~7.2；

3) 当C. thermocellum菌体生长55~100 h，补加玉米棒芯16~28 g；

4) 发酵至105~145 h，接种2~8 ml C. beijerinckii的一级种子，改变发酵温度为30~40 ℃，并一直控制在此温度范围，生产得到丁醇。