[发明专利]一种水环境中雌激素结合体的共检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种水环境中有机污染物的检测技术领域，特别是涉及自然水体样品中痕量天然雌激素结合体的提取、净化和仪器检测方法。

背景技术

由人或哺乳动物卵巢分泌的天然雌激素雌酮(Estrone，E1)、17β-雌二醇(17β-Estradiol，E2)、雌三醇(Estriol，E3)和人工合成雌激素乙炔基雌二醇(17α-Ethinyl Estradiol，EE2)是最具潜在雌性化风险的内分泌干扰物(Endocrine Disrupting Compounds，EDCs)，在水环境中ng/L浓度水平就会导致鱼类的雌性化。雌激素排出时其雌激素分子结构中C3-或者C7-位置的羟基多被硫酸盐或者葡萄糖醛酸所取代，转变成为无雌激素活性的结合体结构，但在水体或污水处理厂生物酶的作用下，会转化为其单体结构，恢复雌激素活性。

近十年来雌激素作为典型的内分泌干扰物受到广泛关注。欧美等国对多家污水处理厂雌激素浓度及去除效率的调查结果显示，在污水处理厂出水及受纳水体中残留着ng/L浓度水平的雌激素。目前，国内外关注自然水体、土壤中雌激素单体的研究比较多，对于环境介质中雌激素结合体的调查研究相对较少，这也包括水环境中雌激素结合体的相关研究。这很大原因归结为水环境中雌激素结合体痕量存在，易受水体基质影响。因次，建立回收率高、重现性好的水环境中天然雌激素结合体分析方法，是进一步研究环境介质中雌激素迁移转化的前提条件。

近年来，痕量有机物的仪器检测技术有了很大的提高，如气相色谱-质谱联用(GC/MS)、气相色谱-串联质谱联用(GC/MS/MS)、液相色谱-质谱联用(LC/MS)、液相色谱-串联质谱联用(LC/MS/MS)等，具有较高的灵敏度和精确度。然而，对于实际环境样品，比如自然水体样品，由于基质干扰作用，使分析方法的准确性和精密性大大降低。因此，如何将水环境中痕量存在的雌激素结合体富集并进行适当净化，成了水环境中雌激素结合体分析的一个瓶颈。

发明内容

本发明的目的是针对水环境中雌激素结合体痕量存在、基质干扰大、前处理技术难度大等问题，拟开发一种回收率高、灵敏度高、准确、快速的分析技术，实现对水环境样品中四种雌激素结合体雌酮硫酸盐结合体(Estrone-3-sulfate，E1-3S)、17β-雌二醇硫酸盐结合体(Estradiol-3-sulfate，E2-3S)及雌酮葡萄糖苷酸结合体(Estrone-3-glucuronide，E1-3G)、17β-雌二醇葡萄糖苷酸结合体(Estradiol-3-glucuronide，E2-3G)的定量测定。

本发明的技术方案如下：

一种检测水环境样品中痕量存在的雌酮硫酸盐结合体(E1-3S)、17β-雌二醇硫酸盐结合体(E2-3S)及雌酮葡萄糖苷酸结合体(E1-3G)、17β-雌二醇葡萄糖苷酸结合体(E2-3G)的定量测定方法。附图1为分析方法具体步骤，其特征在于该方法包括如下部分：

(1)HLB柱富集

水样采用GF/F玻璃纤维滤膜进行过滤，并用盐酸调节pH为3；利用固相萃取装置活化Waters公司的HLB固相萃取柱(200mg，6cc)，活化的顺序为：5mL色谱纯乙酸乙酯、5mL色谱纯甲醇及10mL超纯水，流速为1mL/min；采用已活化的固相萃取柱对水样进行固相萃取富集，控制流速为3mL/min；萃取结束后真空抽干5min，待净化。

(2)NH2柱净化

将用5mL甲醇活化过的Waters公司的NH2柱(500mg，6cc)用固相萃取柱转接头接于干燥的HLB柱下方，接着用6mL甲醇淋洗HLB柱和NH2柱串联装置，去除基质干扰，再用6mL 2％氨水甲醇溶液洗脱NH2柱上的雌激素结合体，洗脱液收集于10mL玻璃离心管中，控制流速为1mL/min，洗脱液在氮气流下缓慢吹干，加入1mL乙腈/水(1/1，v/v)混合液，漩涡混合，冷藏等待浓度测定。

(3)利用液相色谱-串联质谱分析雌激素结合体

液相色谱-串联质谱联用仪器为：Agilent 1100高效液相色谱系统，包括四元输液泵，美国Agilent公司的自动进样器，3200QTRAP型液相色谱/串联质谱仪，配有电喷雾离子化源(ESI)以及Analyst 1.4.1数据处理软件；