[发明专利]用于诊断胃病或胃癌的胶乳增强免疫比浊试剂盒及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种用于诊断胃病或胃癌的胶乳增强免疫比浊试剂盒，其特征在于包括：稀释液、含有胃蛋白酶原I的抗体或胃蛋白酶原II的抗体的胶乳试剂及空白液；

其中所述的胶乳试剂中含有已耦联了胃蛋白酶原I的抗体或胃蛋白酶原II的抗体的不同粒径的聚苯乙烯纳米微球。

2.按照权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述的稀释液为含有反应增强剂的缓冲液，所述的缓冲液为Tris/HCl缓冲液、磷酸盐缓冲液、HE PES缓冲液、甘氨酸缓冲液、巴比妥缓冲液、MOPSO缓冲液、DIPSO缓冲液或HEPPS缓冲液中的任一种，优选为磷酸盐缓冲液；所述的反应增强剂为PEG-300、PEG2000或PEG6000中的任一种或几种，优选为PEG6000；更优选的所述的稀释液中还含有2mol/L的氯化钠。

3.按照权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述的胶乳试剂中含有已耦联了胃蛋白酶原I的抗体或胃蛋白酶原II的抗体的粒径为60-90nm和粒径为160-200nm的聚苯乙烯纳米微球。

4.按照权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述的胶乳试剂按照以下方法制备得到：

(1)胶乳前处理

取1ml未标记的聚苯乙烯纳米微球加入10ml 0.02M pH7.4磷酸缓冲液中，离心机10000rpm离心20min，去掉上清液、再用10ml 0.02M pH7.4磷酸缓冲液重悬颗粒，离心机10000rpm离心20min，去掉上清并用5ml 0.02M pH7.4磷酸缓冲液重悬、4℃保存待用；

(2)胶乳颗粒标记

将步骤(1)处理后胶乳用0.02M pH6.1MES缓冲液将胶乳颗粒稀释成10mg/ml浓度，然后加入1mg EDC，混匀活化15分钟，离心8000rpm弃去上清，并用0.02MPH7.4磷酸缓冲液重悬，加入1mg胃蛋白酶原I或胃蛋白酶原II的抗体于10mg/ml2ml胶乳液体中，室温混匀2-4小时，离心机8000rpm离心15分钟，将上清分离到另外的容器中备用，颗粒使用封闭液重悬，并室温混匀1小时，离心机8000rpm离心15min，沉淀复溶于分散液，将标记完成的胶乳颗粒分装成1ml/支，4℃保存；

(3)使用上述步骤分别对粒径60-90nm和160-200nm的胶乳进行分别标记，标记结束后将所述60-90nm胶乳和所述160-200nm胶乳进行混合，按质量体积百分比计，使60-90nm胶乳的浓度为0.673-0.720％，使160-200nm胶乳的浓度为0.147-0.323％，混合后进行保存，优选的使用上述流程分别对粒径60-80nm和160-180nm的胶乳进行分别标记，标记结束后将所述60-80nm胶乳和所述160-180nm胶乳进行混合，按质量体积百分比计，使60-80nm胶乳浓度为0.673-0.708％，使160-180nm胶乳浓度为0.147-0.235％，混合后进行保存；

所述的封闭液为含有5g/L BSA的0.02M PH7.4的磷酸缓冲液；

所述的分散液由BSA，吐温-20、PVP-K30以及生物防腐剂通过0.02M PH7.4的磷酸缓冲液配制而成，其中BSA浓度为1g/L，吐温-20浓度为0.05％(v/v)，PVP-K30浓度为2g/L，生物防腐剂浓度为0.05％(v/v)。