[发明专利]一种检测多发性骨髓瘤遗传风险的试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学领域，涉及医学和生物技术，具体涉及一种检测多发性骨髓瘤遗传风险的试剂盒，根据检测结果从基因层面评估多发性骨髓瘤发病的风险级别，并作为预防和治疗多发性骨髓瘤的方向指导。 

背景技术

多发性骨髓瘤（multiple myeloma,MM）是浆细胞异常增生的恶性肿瘤。一种进行性的肿瘤性疾病。其特征为骨髓浆细胞瘤和一株完整性的单克隆免疫球蛋白（IgG，IgD或IgE）或Bence Jones蛋白质过度增生。多发性骨髓瘤常伴有多发性溶骨性损害，高钙血症，贫血，肾脏损害，而且对细菌性感染的易感性增高，正常免疫球蛋白的生成收到阻抑。发病率估计为2-3/10万，男女比例为1.6:1，大多患者年龄＞40岁。

MTHFR全称5，10-亚甲基四氢叶酸还原酶编码基因，主要作用是在叶酸代谢通路中将5,10-亚甲基四氢叶酸转化为具有生物学功能的5-甲基四氢叶酸。

5-甲基四氢叶酸可以进一步进入甲基传递通路，通过同型半胱氨酸的重新甲基化过程间接为DNA甲基化和蛋白质甲基化提供并且使血液中的同型半胱氨酸水平保持在一个较低的水平。此外叶酸的中间代谢产物在核苷酸合成过程中也有重要的作用，通过一碳单位代谢为嘌呤环的形成提供碳原子。MTHFR基因的缺陷将导致机体多个基础生化过程的紊乱，包括细胞周期调控、DNA复制、DNA以及蛋白质甲基化修饰等，并进而引发神经管缺陷、癌症、心脑血管疾病等多种病症。

GSTT1即谷胱甘肽硫转移酶T1，是负责多种致癌物质代谢的酶类家族GSTs中的一员。GSTT1的功能是使各类亲电子化合物，如药物、环境毒素、氧化链产物等与谷胱甘肽结合并进入下一步的代谢步骤。GSTT1具有一种多态型—null基因型，即缺失GSTT1基因。国内外的众多研究表明GSTT1基因的这种多态现象与很多类型的癌症发病相关。这可能是因为GSTT1基因的缺失会使得机体解毒能力发生下降，致癌物质在体内积蓄，将大大提高罹患各种癌症的风险度。

综上所述，鉴于MTHFR基因，NQO1基因，GSTT1基因在多发性骨髓瘤癌变过程中有着不可忽视的作用，可以将上述基因作为遗传易感因素来检测出受检者在多发性骨髓瘤发生相关的基因单核苷酸位点基因型，及时筛查出易患多发性骨髓瘤的高危人群，从而有针对性的预防和治疗多发性骨髓瘤，这对于降低多发性骨髓瘤的发病率有非常重要的意义。

发明内容

基于MTHFR基因上C677T位点及A1298C位点多态性，GSTT1基因缺失与否（Present/Null）位点多态性的3个单核苷酸多态性位点基因型可作为评估多发性骨髓瘤发病的危险因子的基础上，本发明提供一种多发性骨髓瘤易感基因检测试剂盒。

该试剂盒包括：

检测MTHFR基因上C677T位点及A1298C位点多态性，GSTT1基因缺失与否（Present/Null）位点多态性的3个单核苷酸多态性位点基因型的特异性引物对及DNA测序引物；

PCR反应组件（包括Taq酶、dNTP混合液、反应缓冲液、ddH2O等）；

PCR产物纯化组件（包括SAP酶、ExoI酶、ddH2O等）；

DNA测序反应组件（包括BigDye mix，EDTA溶液、100%乙醇溶液、70%乙醇溶液、HIDI溶液、ddH2O等）。

本发明试剂盒的组分和含量包括：

PCR反应体系：10×PCR反应缓冲液 2.5ul；25mM dNTP混合液0.2ul；5U/ul Taq DNA聚合酶0.125ul；20uM特异性引物对（每条引物各0.25ul）；ddH2O 19.175ul。

PCR产物纯化体系：1U/ul SAP酶 0.75ul；10U/ul ExoI酶0.375ul；ddH2O 3.875ul。

测序反应体系：25%BigDye mix 1ul；3.2uM DNA测序引物1ul；125mM EDTA溶液1ul；100%乙醇溶液 15ul；70%乙醇溶液30ul；HIDI溶液8ul；ddH2O 2ul。

本试剂盒供一人份检测应用，试剂盒的保存温度为-20℃。

 

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。