[发明专利]慢性淋巴细胞白血病易感基因无创检测试剂盒

说明书

技术领域

 本发明属于分子生物学领域，涉及医学和生物技术，具体涉及一种慢性淋巴细胞白血病易感基因检测试剂盒，根据检测结果从基因层面评估慢性淋巴细胞白血病发病的风险级别，并作为预防和治疗慢性淋巴细胞白血病的方向指导。

背景技术

慢性淋巴细胞性白血病（CLL）是造血系统的一种单克隆性B淋巴细胞增值性疾病。其特点为外周血、骨髓、肝脾和淋巴结均可见到大量的、形态一致的小圆形淋巴细胞聚集，临床表现为慢性过程。本病并无特异性的症状和体征，最突出的表现是外周血淋巴细胞增多和淋巴结肿大，常因常规体检或检查血常规而被发现。随着疾病的进展逐渐出现乏力、发热、盗汗、体重减轻，贫血和感染也愈加明显。因此通过慢性淋巴细胞性白血病易感基因检测提前评估受检者易患慢性淋巴细胞性白血病的风险级别，提早预防和治疗慢性淋巴细胞性白血病，降低发病风险。

XRCC1基因编码的蛋白对因电离辐射和烷基化引起的DNA单链断裂能起到有效的修复作用。该蛋白与DNA连接酶III、聚合酶?、多聚ADP核糖转移酶交互作用，参与DNA的碱基切除修复通路。众多研究显示，XRCC1基因上第399号氨基酸Arg-Gln的替代，可引起XRCC1活性降低，导致个体的DNA修复能力下降，提高癌症的发病风险。

着色性干皮病基因(XPD)是一种重要的DNA 损伤修复基因,参与 DNA核苷酸切除修复。XPD 基因几个核苷酸序列中存在多态性,其中 751Lys/Gln 多态性比较常见。当XPD基因的第751位Lys→Gln时， DNA损伤修复能力降低，基因组稳定性下降，抵抗致癌物质或其他外界因素破坏作用的能力降低，增加了癌症发病风险。

综上所述，鉴于XRCC1基因，XPD基因在慢性淋巴细胞白血病病变过程中有着不可忽视的作用，可以将上述基因作为遗传易感因素来检测出受检者在慢性淋巴细胞白血病发生相关的基因单核苷酸位点基因型，及时筛查出易患慢性淋巴细胞白血病的高危人群，从而有针对性的预防和治疗慢性淋巴细胞白血病，这对于降低慢性淋巴细胞白血病的发病率有非常重要的意义。

发明内容

基于XRCC1基因上Arg399Gln位点，XPD基因上Lys751Gln位点的2个单核苷酸多态性位点基因型可作为评估慢性淋巴细胞白血病发病的危险因子的基础上，本发明提供一种慢性淋巴细胞白血病易感基因检测试剂盒。

该试剂盒包括：

检测XRCC1基因上Arg399Gln位点，XPD基因上Lys751Gln位点的2个单核苷酸多态性位点基因型的特异性引物对及DNA测序引物；

PCR反应组件（包括Taq酶、dNTP混合液、反应缓冲液、ddH2O等）；

PCR产物纯化组件（包括SAP酶、ExoI酶、ddH2O等）；

DNA测序反应组件（包括BigDye mix，EDTA溶液、100%乙醇溶液、70%乙醇溶液、HIDI溶液、ddH2O等）。

本发明试剂盒的组分和含量包括：

PCR反应体系：10×PCR反应缓冲液 2.5ul；25mM dNTP混合液0.2ul；5U/ul Taq DNA聚合酶0.125ul；20uM特异性引物对（每条引物各0.25ul）；ddH2O 19.175ul。

PCR产物纯化体系：1U/ul SAP酶 0.75ul；10U/ul ExoI酶0.375ul；ddH2O 3.875ul。

测序反应体系：25%BigDye mix 1ul；3.2uM DNA测序引物1ul；125mM EDTA溶液1ul；100%乙醇溶液 15ul；70%乙醇溶液30ul；HIDI溶液8ul；ddH2O 2ul。

本试剂盒供一人份检测应用，试剂盒的保存温度为-20℃。

 

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。

除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。

 

实施例1. 检测试剂盒的使用

1、抽提DNA模板

刮取受检者口腔黏膜上皮细胞，用酚氯仿法抽提基因组DNA。

2、PCR扩增反应

使用检测试剂盒中的PCR反应组件，其中，含有下列引物对：