[发明专利]一种通过CD226基因检测胃癌易感性的试剂盒及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种疾病易感性检测用的试剂盒，具体地说是一种通过CD226基因检测胃癌易感性的试剂盒及其用途，其通过检测丝裂原活化蛋白激酶激酶4(CD226)的单核苷酸多态性(SNP)位点来预测胃癌的易感性，属于医疗研究技术领域。

背景技术

胃癌发病率居消化道肿瘤的首位，列全部恶性肿瘤的第三位。我国每年死于胃癌者约为16万人。癌症的发生是一个多因素、多阶段、多基因变异的过程。肿瘤细胞和机体免疫系统的相互作用一直贯穿于整个过程中。作为调节T细胞和NK细胞功能的关键分子，CD226参与了对机体免疫系统对肿瘤的调控。大量的研究表明，肿瘤免疫调控相关基因的单核苷酸多态可以通过改变这些基因的表达水平的方式，影响这些基因在肿瘤发生、发展中的作用。

SNP(Single nucleotide polymorphism)，即单核苷酸多态性，是人类基因组作图的第三代遗传标记，主要是指一类基于单碱基变异引起的DNA序列多态性，包括单碱基转换、颠换，以及单碱基的插入/缺失等。它是基因组最广泛存在的一类多态性标记，已成为研究基因组多态性和识别、定位疾病相关的一种工具。1996年成功研制了SNP检测的实时荧光定量PCR技术，实现了PCR从定性到定量的飞跃，还实现了判断结果的自动性。可利用荧光定量PCR技术研发检测疾病易感性的试剂盒。

CD226是由Shibuya等人于1996克隆成功的，并在2000年第七届人类白细胞分化抗原协作组大会上获得了CD226的编号。人CD226基因定位于染色体18q22-23上，成熟的蛋白由318个氨基酸组成。该分子为一个67kD大小的I型跨膜糖蛋白，属于免疫球蛋白超家族成员，胞膜外区由232个氨基酸组成，含有2个V样结构域；胞浆区有61个氨基酸，胞浆区尾部含有一段EIYVNY基序，可作为非受体型蛋白酪氨酸激酶的底物，并可以和蛋白酪氨酸激酶2氨基端的SH2结构域结合。另外，在CD226胞浆区还存在着酪氨酸激酶II和PKC作用的底物S/T结构。CD226主要表达于活化的T细胞、NK细胞、巨核/血小板谱系以及活化的血管内皮细胞。结合胞浆的上述结构和基序，提示CD226分子可能参与T细胞、NK和血小板活化的信号转导过程。

将CD226特异性单抗Leo-A1mAb或其F(ab’)2片段加入MCL或T细胞培养体系中能抑制T细胞向细胞毒T细胞分化，且只能在MLC初期发挥作用。在杀伤阶段，针对CD226另一功能表位的特异性单抗DX11mAb能在杀伤相抑制CTL对多种肿瘤细胞的杀伤。此外，共聚焦显微镜观察发现：CD226集中分布与T细胞与APC或靶细胞的接触面，目前所发现的能与CD226发生相互作用的分子都是与细胞骨架结构及免疫突触形成有关的分子，这些都提示CD226参与了T细胞免疫突触的形成。而且研究还发现，CD226是一种NK细胞活化性膜受体，主要表达于活化的NK细胞。在重导向杀伤系统中，加入LeoA1-mAb，能明显提高NK细胞对靶细胞的杀伤率。

rs57613010是位于第18号染色体CD226基因启动子区域的一个T＞G多态。其在世界人群的频率分布，T占0.62，G占0.38左右。中国人群的分布T占0.45，G占0.25左右。分子生物学研究表明，T＞G的替代可增加CD226基因启动子与核蛋白的结合，增加CD226基因的表达。通过大规模人群的胃癌病例对照研究，CD226基因启动子区域的T＞G多态与胃癌发生相关，并且呈基因剂量-反应关系。即使在调整年龄、性别、吸烟、肿瘤家族史等多种混杂因素后，这种相关性仍然存在。发明人的研究还显示rs57613010与散发性肠癌及鼻咽癌的发生相关，均表现为rs57613010基因型为G时肿瘤发生率降低。这个SNP的多态可用于评估个体胃癌的易感性。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中存在的上述不足，提供一种通过CD226基因检测胃癌易感性的试剂盒及其用途，其通过检测丝裂原活化蛋白激酶激酶4(CD226)的单核苷酸多态性(SNP)位点来预测胃癌的易感性。

按照本发明提供的技术方案：一种通过CD226基因检测胃癌易感性的试剂盒，包括盒体和装于盒体内的物质，其特征在于：所述盒体内的物质包括检测CD226基因上的rs57613010号SNP位点的特异性引物及特异性荧光探针、Taq DNA聚合酶、dNTP混合液、MgCl₂溶液、荧光定量PCR反应缓冲液和去离子水；

所述特异性引物中的正义引物和反义引物的序列为：

正义引物：5’-AACTAGTATCTAAGGTAGACCTTGGGTAGTG-3’，