[发明专利]多功能磁性荧光微球及其制备方法和应用

权利要求书

1.多功能磁性荧光微球，其特征在于：所述多功能磁性荧光微球包括磁性纳米材料、不同发射光谱特征的荧光材料、桥连DNA和标记有淬灭荧光基团的识别不同靶位点的生物探针，所述磁性纳米材料和荧光材料通过桥连DNA连接，所述桥连DNA含有限制性内切酶识别位点，所述生物探针偶联在所述荧光材料表面。

2.根据权利要求1所述的多功能磁性荧光微球，其特征在于：所述多功能磁性荧光微球是由桥连DNA一端标记的生物素与磁性纳米材料表面标记的链霉亲和素偶联，所述桥连DNA另一端通过末端标记的氨基与表面修饰有羧基的荧光材料偶联，所述荧光材料表面修饰的羧基偶联有至少一种生物探针。

3.根据权利要求1或2所述的多功能磁性荧光微球，其特征在于：所述生物探针为分子信标或/和叶酸。

4.根据权利要求1所述的多功能磁性荧光微球，其特征在于：所述分子信标为识别至少一个靶位点的不同序列的寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针一端分别标记有最大发射波长间隔大于30nm的荧光材料，另一端标记淬灭荧光基团。

5.根据权利要求4所述的多功能磁性荧光微球，其特征在于：所述寡核苷酸探针为识别HBV基因型B、HBV基因型C和HBV基因型D的探针；所述识别HBV基因型B的探针如5'-NH₂-cgtccgtcgcagtcccaaatctccacggacg-BHQ2-3'所示，所述识别HBV基因型C的探针如5'-NH₂-cgtccgcctctacttccaggaacatcaaccggacg-BHQ2-3'所示；所述识别HBV基因型D的核苷酸序列如5'-NH₂- cgtccgcatcatccatataactgaaagccaaacagtgcggacg-BHQ2-3'所示。

6.根据权利要求1或2所述的多功能磁性荧光微球，其特征在于：所述桥连DNA长度为10-40bps。

7.根据权利要求6所述的多功能磁性荧光微球，其特征在于：所述桥连DNA长度为20bps。

8.权利要求1-7任一项所述的多功能磁性荧光微球的制备方法，其特征在于：具体步骤如下：

a、制备磁性纳米材料，然后与桥连ssDNA偶联，制得桥连ssDNA标记的磁性纳米材料，所述桥连ssDNA含有限制性内切酶识别位点；

b、取不同发射光谱特征的荧光材料，然后分别与桥连ssDNA的互补序列ssDNA’和标记有淬灭荧光基团的识别不同靶位点的生物探针偶联，得ssDNA'和生物探针同步标记的荧光材料；

c、将步骤a所得桥连ssDNA标记的磁性纳米材料和步骤b所得ssDNA'和生物探针同步标记的荧光材料混合进行杂交，经磁性富集，得多功能荧光微性微球。

9.根据权利要求8所述的多功能磁性荧光微球的制备方法，其特征在于：

所述步骤a是将磁性纳米材料表面偶联链霉亲和素，然后与5’端标记生物素的桥连ssDNA偶联；

所述步骤b是将荧光材料的表面进行羧基修饰，然后与氨基标记的与所述桥连ssDNA互补的序列ssDNA'和氨基标记的生物探针偶联。

10.权利要求1-7任一项所述多功能磁性荧光微球在靶分子检测或/和靶细胞富集中的应用。