[发明专利]用表面增强拉曼光谱测定胱氨酸的方法

说明书

技术领域

本发明涉及分析化学领域，具体是用表面增强拉曼光谱测定胱氨酸的方法。

背景技术

胱氨酸是氨基酸类药物，有促进机体细胞氧化和还原功能，增加白血球和阻止病原菌发育等作用，主要用于继发性脱发症、慢性肝炎的治疗。因此，药物的质量监控具有十分重要的意义。目前，检测胱氨酸的方法主要有单扫描极谱法，原子吸收光谱法，滴定法，比色法，荧光光谱法，分光光度法，化学发光法，溶出伏安法，共振散射光谱法等。这些测定胱氨酸的方法当中，有的操作复杂，有的灵敏度不够，因此寻求一种灵敏的方法十分必要。表面增强拉曼光谱是一种非常有效的探测界面特性和分子间相互作用、表征表面分子吸附行为和分子结构的工具，具有快速、灵敏、信息丰富、选择性高等特点。近年来，表面增强拉曼光谱被广泛地应用于表面吸附、电化学和催化反应、化学和生物传感器、生物医学检测及痕量分析等领域，并对表面增强拉曼光谱活性基底、增强机理、探针分子、检测技术等方面进行了研究，取得了较好的结果。但表面增强拉曼光谱定量分析的研究报道不多，这与重现性好、稳定性好的表面增强拉曼光谱活性基底不多有关。纳米银溶胶基底具有生物相容性好、制备简便、价格低廉、表面增强拉曼光谱活性高等特点，但聚集纳米银溶胶基底稳定性和重现性有待改善。2-巯基吡啶分子具有较强的表面增强拉曼光谱活性，可以作为表面增强拉曼光谱的探针分子。基于纳米银—2-巯基吡啶表面增强拉曼光谱测定胱氨酸的方法尚未见报道。

发明内容

本发明的目的是为克服现有技术的不足，而提供一种用表面增强拉曼光谱测定胱氨酸的方法。该方法选择性好、稳定性好、灵敏度高，操作简便，试剂易得。

实现本发明的目的技术方案是：在pH 6.6的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲溶液中，纳米银分散均匀，加入2-巯基吡啶溶液时，拉曼信号极弱；但当加入氯化钠溶液后，纳米银发生聚集，2-巯基吡啶吸附在纳米银聚集体表面产生表面增强拉曼散射效应。在选定条件下，2-巯基吡啶浓度与表面增强拉曼强度增强值呈良好线性关系。当有胱氨酸存在时，可导致2-巯基吡啶分子的表面增强拉曼散射峰强度线性减弱，据此可建立测定胱氨酸的定量分析方法。

用表面增强拉曼光谱测定胱氨酸的方法，包括如下步骤：

（1）制备已知浓度的胱氨酸标准测试体系：于5 mL刻度试管中，依次加入350～1000 μL 19.9 mg/L 纳米银溶液、30～200 μL 0.2 mol/L pH 6.6 的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲溶液，10～100 μL 1.0×10^-5 mol/L 2-巯基吡啶溶液、10～60 μL 2.0×10^-5 mol/L胱氨酸，20～100 μL 2.0 mol/L 氯化钠溶液，摇匀，用二次蒸馏水定容到2.0 mL，置于超声波仪超声15分钟；

（2）按步骤（1）的方法不加胱氨酸制备空白对照体系；

（3）取上述体系的溶液分别置于石英比色皿中，在拉曼光谱仪上，设定仪器参数，扫描获得体系的表面增强拉曼光谱，测定1002 cm^-1处的表面增强拉曼散射峰强度值为I，同时测定空白对照体系的表面增强拉曼散射峰强度值为I₀，计算ΔI =I₀- I；

（4）以ΔI对胱氨酸的浓度关系做工作曲线；

（5）依照步骤（1）的方法制备待检测样品分析溶液，其中加入的胱氨酸标准溶液替换为被测样品溶液，并按步骤（3）的方法测定被测样品分析溶液的表面增强拉曼散射峰强度值为I_样品，计算ΔI_样品=I₀-I_样品;

（6）依据步骤（4）的工作曲线，计算出被测样品中胱氨酸的含量。

所述的胱氨酸标准溶液配制方法是：每100毫克胱氨酸标准品加0.1 mol/L 盐酸溶液10 mL使溶解，再用二次蒸馏水稀释至需要的浓度。

本发明的优点是：

与已有的方法相比，本测定方法的仪器简单，选择性好、稳定性好、灵敏度高，操作简便，试剂易得。

附图说明

图1为本发明具体实施方式中的部分表面增强拉曼散射光谱图。