[发明专利]鸭促性腺激素释放激素受体基因(GNRHR)

说明书

技术领域

本发明涉及一种鸭促性腺激素释放激素受体基因(GNRHR)核苷酸序列及基因编码的氨基酸序列，属于分子生物学技术领域。

背景技术

我国是世界上养鸭数量、产品消费和出口贸易的第一大国。根据FAO的数据统计：2006年，我国鸭存栏量超过7.25亿只，占世界总存栏量的69.28％左右，养鸭业逐步成为我国经济结构中的特色产业和农村经济发展的支柱产业之一。但是，关于鸭分子生物学研究大大落后于鸭育种和生产的发展，这些成果取得仍然依靠传统的育种和生产技术。

促性腺激素释放激素受体在动物生殖发育调控过程中起着关键作用。促性腺激素释放激素与垂体中的促性腺激素释放激素受体结合，能促进促黄体素(LH)和促卵泡素(FSH)的合成与释放，促进性腺的生长、成熟和调节动物的繁殖功能及行为。Ikemoto.T等(2004)报道，GNRH经过和它的特定受体(GNRHR)的交互作用在动物生殖功能活动中扮演一个关键性的角色。Kim等(2003)研究表明，抑制动物GNRH及其受体基因的表达将极大抑制其生殖活动。目前，猪、山羊、鸡等动物的促性腺激素释放激素受体基因序列已陆续被报道，它与初产母猪黄体生成数(Jiang等，2001)、山羊产羔数(储明星等，2009)和母鸡产双黄蛋数(Dunn等，2004)相关显著，该基因是提高动物繁殖性能的重要侯选基因。但是鸭促性腺激素释放激素受体基因还未曾有报道，极大地制约了鸭分子遗传育种的研究和生物技术在鸭生产中的应用，影响了养鸭业地快速发展。

发明内容

本发明的目的是为了利用基因工程技术加快对鸭繁殖性能的改良，提供鸭促性腺激素释放激素受体基因(GNRHR)核苷酸序列、编码的氨基酸序列以及获得该基因序列的引物序列。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的。

鸭促性腺激素释放激素受体基因(GNRHR)，它经由以下两对引物：GF4(SEQID No：14)与GR4(SEQ ID No：15)；GF5(SEQID No：16)与GR5(SEQID No：17)克隆测序获得。鸭促性腺激素释放激素受体基因，在于核苷酸序列SEQ IDNo：1所示。所述的鸭促性腺激素释放激素受体基因及基因编码的氨基酸序列SEQ ID No：2所示。

所述方法包括下列步骤：(1)根据已知动物GNRHR基因的序列分析该基因结构和保守区域；(2)根据Genebank中鸡GNRHR基因的序列(nc_006096.2)和鸡chromosome 10(NW_001471429.1)的信息，设计一对位于GNRHR基因第2外显子上的引物GF1和GR1，GF1的序列如SEQ ID No：3，GR1的序列如SEQ ID No：4；(3)以鸭基因组DNA为模板，利用引物GF1和GR1扩增并克隆测序得到DG1序列121bp，DG1的序列如SEQ ID No：5；(4)序列DG1与鸡G HR基因进行比对，发现同源性达92％，判定该段序列为GNRHR基因上的序列；(5)根据DG1与鸡GNRHR基因序列设计两对引物GF2、GR2和GF3、GR3，GF2位于GRHR基因的第一外显子位置，其序列如SEQ ID No：6，GR3位于GNRHR基因的第三外显子位置，其序列如SEQ ID No：7，GR2和GF3均位于GNRHR基因的第二外显子位置，序列分别如SEQ ID No：8和SEQ ID No：9；(6)以GF2、GR2和GF3、GR3两对引物扩增鸭基因组DNA，分别克隆测序得到DG2和DG3序列，DG2和DG3序列分别如SEQ ID No：10，SEQ ID No：11；(7)DG2和DG3序列分别与鸡GNRHR基因比对，同源性分别达到89％、88％；(8)根据DG2序列设计上游引物GF4，其序列如SEQ ID No：12，根据DG3序列设计一条下游引物GR4，其序列如SEQ ID No：13，用于扩增鸭GNRHR基因大部分全长序列；(9)利用引物GF4和GR4扩增鸭基因组DNA，克隆测序获得鸭GNRHR基因大部分全长序列DG4，其序列如SEQ ID No：14；(10)根据DG3序列设计一条上游引物GF5，其序列如SEQ ID No：15，根据鸡GNRHR基因3’UTR区设计一条下游引物GR5，其序列如SEQ ID No：16；(11)利用引物GF5和GR5扩增鸭基因组DNA，克隆测序获得一条鸭GNRHR基因3’UTR区序列DG5，其序列如SEQ ID No：17；(12)通过DNAstar、Bioedit等软件编辑和拼接，最终获得GNRHR全长序列。