[发明专利]基于多聚半乳糖醛酸酶Pcipg8基因开发的检测辣椒疫霉菌的引物及方法有效
| 申请号： | 201210123020.9 | 申请日： | 2012-04-25 |
| 公开（公告）号： | CN102634585A | 公开（公告）日： | 2012-08-15 |
| 发明（设计）人： | 张修国 | 申请（专利权）人： | 山东农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/06;C12Q1/04;C12N15/11;G01N21/64 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人： | 关畅;任凤华 |
| 地址： | 271018 山东省泰安市*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基于 半乳糖 醛酸 pcipg8 基因 开发 检测 辣椒 霉菌 引物 方法 | ||
1.检测或辅助检测辣椒疫霉的特异引物对，其特征在于：所述引物对由序列表中序列1所示的单链DNA和序列表中序列2所示的单链DNA组成。
2.检测或辅助检测辣椒疫霉的PCR试剂，其特征在于：所述试剂含有权利要求1所述的特异引物对。
3.检测或辅助检测辣椒疫霉的PCR试剂盒，其特征在于：所述试剂盒含有为权利要求1所述的特异引物对。
4.权利要求1所述的特异引物对在制备检测或辅助检测辣椒疫霉的试剂或试剂盒中的应用。
5.权利要求1所述特异性引物对在检测或辅助检测辣椒疫霉中的应用。
6.检测或辅助检测辣椒疫霉的方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：用权利要求1所述特异性引物对对待测样品进行PCR，确定待测样品中是否含有辣椒疫霉或确定待测样品中辣椒疫霉的含量。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：按照如下方法确定待测样品中是否含有辣椒疫霉：以所述待测样品的基因组DNA或总RNA反转录得到的cDNA为模板，用权利要求1所述特异性引物对进行PCR扩增，检测得到的PCR扩增产物，若所述PCR扩增产物满足下述1)或2)的条件，则所述待测样品含有辣椒疫霉或候选含有辣椒疫霉；若所述PCR扩增产物不满足所述1)或2)的条件，则所述待测样品不含有辣椒疫霉或候选不含有辣椒疫霉；
1)所述PCR扩增产物为176bp的片段；
2)所述PCR扩增产物在琼脂糖凝胶电泳显示为一条100bp-200bp的条带。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述方法中采用如下条件的PCR扩增确定待测样品中是否含有辣椒疫霉：95℃预变性3min；94℃变性2min，50℃30s，72℃1min，40个循环。
9.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述方法中采用实时荧光定量PCR确定待测样品中辣椒疫霉的含量。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：所述实时荧光定量PCR的循环条件如下：95℃预变性2min；94℃变性30s，55℃退火20s，68℃延伸55s，40个循环。
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