[发明专利]一种制备白花丹苷A的方法

说明书

技术领域

本发明属于天然药物化学领域，特别是涉及一种制备白花丹苷A的方法。

背景技术

白花丹苷A（Plumbaside A）为酚苷类物质，CAS号126582-70-5，分子式C₁₇H₂₀O₈，分子量352.34。白花丹苷A来源于白花丹科(Plumbaginaceae)小蓝雪花的全草，具有免疫促进作用，体外在浓度为100～1pg/ml时能提高T-淋巴细胞的增殖能力。

小蓝雪花为白花丹科蓝雪花属落叶灌木，我国特产。分布于四川西部和西藏东部，南至云南中部，北达甘肃文县；生于干热河谷的岩壁和砾石或砂质基地上，多见于山麓、路边、河边向阳处。全株治主治：风湿麻木；脘腹胁痛；跌打损伤；骨折；脉管炎；腮腺炎。

发明内容

本发明的目的是提供一种制备白花丹苷A的方法。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：

（1）取小蓝雪花全草粉碎，加生物酶拌匀，常温酶解1-3天，酶解原料用温水浸泡提取2-3次，过滤后得到提取液；

（2）提取液用超滤膜超滤，透过液加入聚酰胺色谱柱，用乙醇水溶液洗脱，洗脱液浓缩得粗提物；

（3）把上述粗提物采用高速逆流色谱分离，紫外检测器监测，收集目标成分，减压干燥得白花丹苷A。

步骤（1）中所述的生物酶可选纤维素酶、淀粉酶和果胶酶，用量为原料量的2-5‰。

步骤（2）中所述的超滤膜为截留分子量2000-10000的中空纤维素超滤膜。

步骤（2）中所述的聚酰胺树脂为200-400目，乙醇水溶液浓度为60-75%，用量是3-6BV。

步骤（3）中所述的高速逆流色谱的溶剂系统为乙酸乙酯-甲醇-水，比例为45-50:1-2:47-51，下相为流动相，上相为固定相。

本发明采用生物酶发酵，可以缩短提取周期，提高提取率；采用膜过滤技术分离，物理方法除杂，操作简单，不污染环境；采用高速逆流色谱分离，分离速度快，样品无损失，溶剂可以循环使用，制备量大。

具体实施方式

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明。

实施例1：

取纤维酶5g溶于5L水，加入粉碎的5kg小蓝雪花全草中拌匀，常温酶解3天，酶解原料用70℃温水浸泡提取2次，每次加40kg，提取液过滤后用截留分子量2000的中空纤维素超滤膜超滤，透过液加入200-400目聚酰胺色谱柱，用4BV60%乙醇水溶液洗脱，洗脱液浓缩得粗提物20g。取乙酸乙酯、甲醇、水按45:1:47混合，充分分层后，取上相注满高速逆流色谱柱，同时开转主机900rpm，泵入下相做流动相，待系统平衡后，流速调节为3ml/min，同时用流动相溶解粗提物，由进样阀进样，紫外检测器监测，收集目标流分，连续制备，合并流分减压干燥得白色白花丹苷A2.0g，经HPLC检测，纯度98.9%。

实施例2：

取淀粉酶10g溶于5L水，加入粉碎的5kg小蓝雪花全草中拌匀，常温酶解1天，酶解原料用60℃温水浸泡提取3次，每次加30kg，提取液过滤后用截留分子量6000的中空纤维素超滤膜超滤，透过液加入200-400目聚酰胺色谱柱，用6BV65%乙醇水溶液洗脱，洗脱液浓缩得粗提物12g。取乙酸乙酯、甲醇、水按50:2:51混合，充分分层后，取上相注满高速逆流色谱柱，同时开转主机800rpm，泵入下相做流动相，待系统平衡后，流速调节为2ml/min，同时用流动相溶解粗提物，由进样阀进样，紫外检测器监测，收集目标流分，连续制备，合并流分减压干燥得白色白花丹苷A2.5g，经HPLC检测，纯度98.1%。

实施例3：

取淀粉酶5和果胶酶10g溶于5L水，加入粉碎的5kg小蓝雪花全草中拌匀，常温酶解1天，酶解原料用60℃温水浸泡提取3次，每次加30kg，提取液过滤后用截留分子量6000的中空纤维素超滤膜超滤，透过液加入200-400目聚酰胺色谱柱，用3BV70%乙醇水溶液洗脱，洗脱液浓缩得粗提物12g。取乙酸乙酯、甲醇、水按50:1:50混合，充分分层后，取上相注满高速逆流色谱柱，同时开转主机850rpm，泵入下相做流动相，待系统平衡后，流速调节为2.5ml/min，同时用流动相溶解粗提物，由进样阀进样，紫外检测器监测，收集目标流分，连续制备，合并流分减压干燥得白色白花丹苷A2.7g，经HPLC检测，纯度98.7%。

实施例4：