[发明专利]一种降解苯酚的基因工程菌及其构建方法和应用无效
| 申请号： | 201210120681.6 | 申请日： | 2012-04-23 |
| 公开（公告）号： | CN102660489A | 公开（公告）日： | 2012-09-12 |
| 发明（设计）人： | 赵华;陈坤;杨晶;张同存 | 申请（专利权）人： | 天津科技大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/75;A62D3/02;C02F3/34;C12R1/125;A62D101/28;C02F101/34 |
| 代理公司： | 天津盛理知识产权代理有限公司 12209 | 代理人： | 王来佳 |
| 地址： | 300457 天津市滨*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 降解 苯酚 基因工程 及其 构建 方法 应用 | ||
1.一种降解苯酚的基因工程菌，其特征在于：含有苯酚羟化酶基因。
2.根据权利要求1所述的降解苯酚的基因工程菌，其特征在于：所述苯酚羟化酶基因来自铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa PA01。
3.根据权利要求1所述的降解苯酚的基因工程菌，其特征在于：所述基因工程菌的宿主菌为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis DB1342。
4.一种如权利要求1或2或3所述的降解苯酚的基因工程菌的构建方法，其特征在于：步骤如下：
(1)PCR扩增苯酚羟化酶基因
从GenBank数据库中检索出铜绿假单胞杆菌PA01中苯酚羟化酶大亚基N的基因保守序列，利用DNAMAN软件设计引物进行扩增获得目的片段，正向引物见序列1，反向引物见序列2，PCR扩增获得苯酚羟化酶基因；
(2)重组质粒的构建
用BamH I和Sal I进行双酶切PCR产物，与同样经过BamH I和Sal I双酶切的克隆表达载体pWB980相连接；
(3)转化
将步骤(2)的连接产物转入E.coli DH5α感受态中，取150μL转化产物，涂布于包含卡那霉素的LB平板上，30-45℃，210-230rpm过夜培养，挑取单菌落，分装含有卡那霉素的LB培养基，30-45℃，210-230rpm培养8-15h，提取质粒，重组质粒经PCR及酶切鉴定目的片段已经插入了载体，将验证成功的重组质粒转化进入枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis DB1342中，获得降解苯酚的基因工程菌。
5.一种权利要求1所述的降解苯酚的基因工程菌在降解苯酚中的应用。
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