[发明专利]一种高浓度淡水小球藻培养ss型褶皱臂尾轮虫的方法

说明书

技术领域

本发明属于轮虫培养技术领域，尤其是涉及一种高浓度淡水小球藻培养ss型(超微轮虫)褶皱臂尾轮虫的方法。

背景技术

轮虫是一群微小的多细胞动物，种类多，广泛分布于淡水、半咸水和海水中，对环境适应性强，营养丰富，干物质中蛋白质含量57％、脂肪20％、钙1.8％、磷15％，且其大小、形状适口，容易被鱼、虾、蟹幼体消化吸收，是鱼、虾、蟹幼体理想的动物性饵料。

轮虫在水产动物种苗生产中作为活饵料的应用，大大促进了水产动物种苗生产的发展，尤其是近几年来，随着水产动物种苗的培育密度不断提高，作为优质活饵料，轮虫的需求量也就越来越大，因此能否持续生产轮虫，已成为水产动物种苗生产不可短缺的环节。目前生产性的轮虫培育，一般的培养密度只有200个/mL左右，由于培育水体相对较大，环境条件较难控制，不仅占用了较多的水体，也造成生产成本的提高，因此如何培养高密度的轮虫成为亟待解决的问题。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种高密度淡水小球藻培养ss型褶皱臂尾轮虫的方法。

本发明的技术方案是一种高浓度淡水小球藻培养ss型褶皱臂尾轮虫的方法，包括以下步骤：

(1)、培养容器消毒处理

对培养容器的器壁进行消毒处理，消毒后用海水冲洗干净；

(2)、培养基的配制

将经过过滤和消毒的纯净海水与淡水混合，配制成盐度为1.5～2.0％，调节pH值到7～9，然后过滤并用紫外线照射后得到培养基；

(3)、轮虫的接种与培养

将驯化的轮虫接种到培养基中，保持培养基的温度为28～32℃，pH为7～9，溶解氧DO大于8ppm，盐度为1.5～2.0％，并向培养基内持续供应高密度淡水小球藻，当轮虫的密度达到10000个/mL以上时，收集轮虫。本发明使用纳米气石向培养基内通入纯氧，保持溶解氧DO大于8。

优选，步骤(1)中采用6％的次氯酸钠溶液对培养容器进行消毒处理。

优选，步骤(2)中，将经过过滤和消毒的纯净海水与淡水混合，配制成盐度为1.6％，调节pH值到7，然后过滤并用紫外线照射后得到培养基。

优选，步骤(2)中用碳酸氢钠调节培养基的pH，且培养基的过滤分为两个阶段，第一阶段采用沙滤的过滤，第二阶段采用5μm的滤布过滤。

优选，步骤(3)中用于接种的轮虫为驯化的轮虫，从自然界25℃水温养殖水域中收集褶皱臂尾轮虫，放置在所述经过处理过的培养基中，接种密度为500个/mL，每天将温度调高1℃，7天后温度升高到32℃，驯化过程完成，自然界的褶皱臂尾轮虫一般情况下，随着自然温度的升高体型逐渐变小，用这一方法得到ss型褶皱臂尾轮虫。

优选，步骤(3)中，将轮虫接种到30℃的培养基中，且轮虫的接种密度为5000个体/mL，光照强度为2000LUX。

优选，步骤(3)中用蠕动泵向培养基内持续供应高密度淡水小球藻。

优选，步骤(3)中，高密度淡水小球藻向培养基内的加入量为21mL小球藻/亿轮虫/小时。

优选，步骤(3)中所用的高密度淡水小球藻的pH值为5.8～6.5，维生素B12大于等于1mg/L，细胞浓度大于等于100亿个/L，湿重大于等于44％。本发明用的高密度淡水小球藻购于韩国大象集团。

优选，步骤(3)中，当培养基内轮虫的密度达到15000个/mL以上时，收集轮虫。

本发明采用的轮虫密度的测量方法为从培养基中取100μl轮虫5次，在解剖镜下分别计数；计算五次平均值作为轮虫的培养密度，根据培养密度，调节高密度淡水小球藻的投喂量。

本发明的优点及效果：本发明中轮虫的每天生长率达到2～10倍，接种24小时后的密度可达到平均10000-15000个体/mL，用20升高浓度小球藻培养出30亿轮虫，产卵率为30～40％。轮虫的培养非常方便，可以得到较纯的超微轮虫种。

具体实施方式

为了理解本发明，下面通过具体的实施例对本发明作进一步说明。

实施例一

(1)、培养容器消毒处理

培养容器采用2000升的培养桶，用6％的次氯酸钠溶液对桶壁进行消毒处理，消毒后用海水冲洗干净；

(2)、培养基的配制

将经过过滤和消毒的纯净海水，纯净海水盐度为3.1％，温度为27℃，加入淡水混合，配制成盐度为1.5％，调节pH值到7，然后经沙滤及滤布分别过滤并用紫外线照射消毒后得到培养基，放入蓄水池备用；

(3)、轮虫的驯化