[发明专利]一种黄蝉素的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于天然植物有效成分分离领域，涉及一种黄蝉素的制备方法。

背景技术

黄蝉素（Allamcin），分子式C₁₃H₁₄O₅，分子量250.25。黄蝉素具有细胞毒活性，对纤维肉瘤(fibrosarcoma)、黑色素瘤、乳癌、肺癌、结肠癌、KB细胞、P388的ED₅₀(μg/mL)依次为3.1、0.9、0.1、1.2、0.3、0.3和0.2。

黄蝉素来源于夹竹桃科(Apocynaceae)黄蝉Allamanda neriifolia Hook.的叶，黄蝉叶主要成分为黄蝉素和黄蝉花辛。目前对黄蝉素的研究较少，国内尚无有关黄蝉素提取工艺方面的报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种黄蝉素的制备方法。

本发明技术方案如下：

一种黄蝉素的制备方法，其特征在于所述的方法包括以下步骤：

（1）在超声条件下，先采用生物酶对黄蝉叶进行酶解，再以75-90%的乙醇溶液为提取剂，在60-85℃下进行提取，每次1-3h，提取2-3次，过滤，得到提取液；

（2）将步骤（1）所得提取液室温下放置1-2h，过滤，滤液浓缩至醇浓度为30-50%，静置沉淀，2900-3200rpm高速离心，得到沉淀；

（3）沉淀用氯仿回流溶解，趁热过滤，放置，分离沉析物，干燥即得黄蝉素。

所述步骤（1）中生物酶为纤维素酶和果胶酶的复合酶，质量比为1:1，超声频率为20-60KHz。

本发明优势在于：采用超声辅助酶法提取黄蝉叶中黄蝉素成分，条件温和，提取率高，杂质少。

具体实施方式

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

实施例1：

将黄蝉叶1.5kg粉碎，在超声条件下，超声频率为60KHz，先采用纤维素酶和果胶酶的复合酶，质量比为1:1，对黄蝉叶进行酶解10h，再用18L90%的乙醇溶液，在85℃下进行提取，每次3h，提取2次，过滤，得到提取液，室温下放置2h，过滤，滤液浓缩至醇浓度为30%，静置沉淀，3200rpm高速离心，得到沉淀，用200ml氯仿60℃回流溶解，趁热过滤，放置，分离沉析物，干燥即得黄蝉素，含量68.5%。

实施例2：

将黄蝉叶1.5kg粉碎，在超声条件下，超声频率为40KHz，先采用纤维素酶和果胶酶的复合酶，质量比为1:1，对黄蝉叶进行酶解18h，再用12L75%的乙醇溶液，在65℃下进行提取，每次1.5h，提取3次，过滤，得到提取液，室温下放置2h，过滤，滤液浓缩至醇浓度为30%，静置沉淀，3200rpm高速离心，得到沉淀，用200ml氯仿80℃回流溶解，趁热过滤，放置，分离沉析物，干燥即得黄蝉素，含量55.4%。

实施例3：

将黄蝉叶1.5kg粉碎，在超声条件下，超声频率为20KHz，先采用纤维素酶和果胶酶的复合酶，质量比为1:1，对黄蝉叶进行酶解6h，再用15L85%的乙醇溶液，在70℃下进行提取，每次2h，提取3次，过滤，得到提取液，室温下放置2h，过滤，滤液浓缩至醇浓度为40%，静置沉淀，3200rpm高速离心，得到沉淀，用200ml氯仿80℃回流溶解，趁热过滤，放置，分离沉析物，干燥即得黄蝉素，含量58.7%。

实施例4：

将黄蝉叶1.5kg粉碎，在超声条件下，超声频率为20-60KHz，先采用纤维素酶和果胶酶的复合酶，质量比为1:1，对黄蝉叶进行酶解8h，再用10L80%的乙醇溶液，在65℃下进行提取，每次1h，提取3次，过滤，得到提取液，室温下放置1h，过滤，滤液浓缩至醇浓度为35%，静置沉淀，3100rpm高速离心，得到沉淀，用200ml氯仿65℃回流溶解，趁热过滤，放置，分离沉析物，干燥即得黄蝉素，含量43.2%。

实施例5：

将黄蝉叶2kg粉碎，在超声条件下，超声频率为20-60KHz，先采用纤维素酶和果胶酶的复合酶，质量比为1:1，对黄蝉叶进行酶解12h，再用12L80%的乙醇溶液，在65℃下进行提取，每次1h，提取3次，过滤，得到提取液，室温下放置1.5h，过滤，滤液浓缩至醇浓度为40%，静置沉淀，3000rpm高速离心，得到沉淀，用250ml氯仿65℃回流溶解，趁热过滤，放置，分离沉析物，干燥即得黄蝉素，含量65.6%。

实施例6：

将黄蝉叶2kg粉碎，在超声条件下，超声频率为20-60KHz，先采用纤维素酶和果胶酶的复合酶，质量比为1:1，对黄蝉叶进行酶解15h，再用8L75%的乙醇溶液，在75℃下进行提取，每次3h，提取2次，过滤，得到提取液，室温下放置1h，过滤，滤液浓缩至醇浓度为50%，静置沉淀，2900rpm高速离心，得到沉淀，用220ml氯仿80℃回流溶解，趁热过滤，放置，分离沉析物，干燥即得黄蝉素，含量59.8%。