[发明专利]一种制备叶下珠斯泰丁A的方法

说明书

技术领域

本发明属于中药化学技术领域，涉及一种制备叶下珠斯泰丁A的方法。

背景技术

叶下珠斯泰丁A（Phyllanthostatin A）是一种木脂素类化合物，分子式为C₂₉H₃₀O₁₃，分子量为586.55，为无定性固体，mp.127-130℃。主要存在于大戟科渐尖叶下珠Phyllanthus acuminatus Vahl.的根中、不齐浅裂叶下珠Phyllanthus anisolvbus的叶和枝中。药理学研究表明叶下珠斯泰丁具有细胞抑制活性，体外抑制PS白血病细胞生长，ED₅₀为4μg/mL。

目前对叶下珠斯泰丁A的研究较少，因此提供一种叶下珠斯泰丁A的制备方法对含有叶下珠斯泰丁A的药材资源开发及药理研究具有重要意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种操作简单、制备量大、纯度高，适合工业化生产的制备叶下珠斯泰丁A的方法。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种制备叶下珠斯泰丁A的方法，其特征在于包括以下步骤：

A.提取：取富含叶下珠斯泰丁A的药材粉碎，依次用70-90%丙酮和75-95%乙醇渗漉提取，合并提取液，浓缩成浸膏，得提取液浸膏；

B.萃取：将上述提取液浸膏用正丁醇萃取，萃取液进行浓缩得浸膏；

C.柱层析：将上述浸膏用中性氧化镁拌样上柱，石油醚-丙酮按体积比20:1-3:1进行梯度洗脱，收集各部分洗脱液；

D.制备液相纯化：将石油醚-丙酮（3:1）洗脱液浓缩干燥，用制备液相色谱分离纯化，流速为20-50ml/min，流动相为甲醇-乙腈-水（18:35:47）。

所述步骤C中，氧化镁目数为100-200目，氧化镁柱为中低压柱，柱压为5-8bar，柱径高比为1:7-10。

本发明的有益效果是：采用本发明方法，操作简单、制备量大、得率高、产品纯度高，适合工业化生产。

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

具体实施方式

实施例1：

取渐尖叶下珠根粉碎，先用70%的丙酮渗漉提取，再用85%乙醇渗漉提取，合并丙酮提取液和乙醇提取液，减压浓缩得提取浸膏，用正丁醇萃取4次，合并正丁醇萃取液，浓缩得萃取浸膏，将浸膏用少量中性氧化镁混合拌样，低温烘干，上样至100-200目的中性氧化镁低压柱（柱压为6bar，柱径高比为1:7），用石油醚-丙酮按体积比20:1-3:1进行梯度洗脱，收集各部分洗脱液，将石油醚-丙酮（3:1）洗脱液浓缩、干燥，得粗品。将粗品用制备高效液相色谱分离纯化，流速为20ml/min，流动相为甲醇-乙腈-水（18:35:47），紫外检测器在线监测，针对性收集叶下珠斯泰丁A的制备流分溶液，减压回收试剂得叶下珠斯泰丁A，含量为96.7%。

实施例2：

取渐尖叶下珠根粉碎，先用80%的丙酮渗漉提取，再用90%乙醇渗漉提取，合并丙酮提取液和乙醇提取液，减压浓缩得提取浸膏，用正丁醇萃取4次，合并正丁醇萃取液，浓缩得萃取浸膏，将浸膏用少量中性氧化镁混合拌样，低温烘干，上样至100-200目的中性氧化镁低压柱（柱压为5bar，柱径高比为1:10），用石油醚-丙酮按体积比20:1-3:1进行梯度洗脱，收集各部分洗脱液，将石油醚-丙酮（3:1）洗脱液浓缩、干燥，得粗品。将粗品用制备高效液相色谱分离纯化，流速为40ml/min，流动相为甲醇-乙腈-水（18:35:47），紫外检测器在线监测，针对性收集叶下珠斯泰丁A的制备流分溶液，减压回收试剂得叶下珠斯泰丁A，含量为95.5%。

实施例3：

取渐尖叶下珠根粉碎，先用90%的丙酮渗漉提取，再用95%乙醇渗漉提取，合并丙酮提取液和乙醇提取液，减压浓缩得提取浸膏，用正丁醇萃取4次，合并正丁醇萃取液，浓缩得萃取浸膏，将浸膏用少量中性氧化镁混合拌样，低温烘干，上样至100-200目的中性氧化镁低压柱（柱压为8bar，柱径高比为1:9），用石油醚-丙酮按体积比20:1-3:1进行梯度洗脱，收集各部分洗脱液，将石油醚-丙酮（3:1）洗脱液浓缩、干燥，得粗品。将粗品用制备高效液相色谱分离纯化，流速为50ml/min，流动相为甲醇-乙腈-水（18:35:47），紫外检测器在线监测，针对性收集叶下珠斯泰丁A的制备流分溶液，减压回收试剂得叶下珠斯泰丁A，含量为96.2%。

实施例4：

取渐尖叶下珠根粉碎，先用75%的丙酮渗漉提取，再用75%乙醇渗漉提取，合并丙酮提取液和乙醇提取液，减压浓缩得提取浸膏，用正丁醇萃取4次，合并正丁醇萃取液，浓缩得萃取浸膏，将浸膏用少量中性氧化镁混合拌样，低温烘干，上样至100-200目的中性氧化镁低压柱（柱压为7bar，柱径高比为1:8），用石油醚-丙酮按体积比20:1-3:1进行梯度洗脱，收集各部分洗脱液，将石油醚-丙酮（3:1）洗脱液浓缩、干燥，得粗品。将粗品用制备高效液相色谱分离纯化，流速为30ml/min，流动相为甲醇-乙腈-水（18:35:47），紫外检测器在线监测，针对性收集叶下珠斯泰丁A的制备流分溶液，减压回收试剂得叶下珠斯泰丁A，含量为95.8%。